苦荞过敏原TBa 的表位突变及免疫活性鉴定

doi:10.7506/spkx1002-6630-201013039

食品科学 ›› 2010, Vol. 31 ›› Issue (13): 169-173.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201013039

苦荞过敏原TBa 的表位突变及免疫活性鉴定

任晓霞¹，张昕²，崔晓东¹，李玉英¹，王转花^{1 ,*}

1.化学生物学与分子工程教育部重点实验室，山西大学生物技术研究所
2.山西大学环境科学与工程研究中心

收稿日期:2009-10-23 修回日期:2010-04-21 出版日期:2010-07-01 发布日期:2010-12-29
通讯作者: 王转花 E-mail:zhwang@sxu.edu.cn
基金资助:
国家自然科学基金项目(30870525；30671084)；山西省自然科学基金项目(2007011077)

Immunological Characterization and Mutational Analysis of Allergen TBa in Tartary Buckwheat

REN Xiao-xia1，ZHANG Xin2，CUI Xiao-dong1，LI Yu-ying1，WANG Zhuan-hua1,*

1. Key Laboratory of Chemical Biology and Molecular Engineering, Ministry of Education, Institute of Biotechnology,
Shanxi University, Taiyuan 030006, China；2. Research Center for Environmental Science and Engineering, Shanxi University,
Taiyuan 030006, China

Received:2009-10-23 Revised:2010-04-21 Online:2010-07-01 Published:2010-12-29
Contact: WANG Zhuan-hua E-mail:zhwang@sxu.edu.cn

摘要/Abstract

摘要：

前期研究曾分离获得一种纯度均一的天然苦荞过敏蛋白(tartary buckwheat allergen a，TBa )，免疫检测发现其为苦荞中的主要过敏原。本实验采用定点突变的方法对得分较高的表位E1 的基因进行分子改造，构建5 个突变体L39R、L42R、L47R、V52R、L54R。在大肠杆菌BL21 中分别进行表达，经Ni2+-NTA 亲和纯化后得到纯度较高的重组突变体蛋白。ELISA 和点杂交检测发现，与突变前的E1 相比，突变体L42R、L47R、L54R 的免疫活性明显降低，这表明Leu42、Leu47、Leu54 在TBa 的过敏性中起着至关重要的作用。

关键词: 苦荞, 过敏原, 定点突变, 免疫活性

Abstract:

Buckwheat not only contains abundant nutriments such as flavoniods, but also has allergenic proteins that cause hypersensitive reactions. A natural allergenic protein with molecular weight of 24 kD named TBa (tartary buckwheat allergen A) has been obtained after separation and purification in our previous studies. According to its biological information, 5 mutants including L39R, L42R, L47R, V52R and L54R were constructed through site-directed mutagenesis and expressed in Escherichia coli BL21. The expressed products were purified by Ni2+ affinity chromatography. Purified recombinant proteins were examined using ELISA and dot blot and mutants L42R, L47R and L54R presented a weaker ability to bind tartary buckwheat allergic patients serum IgE than original E1, which suggests that Leu42, Leu47 and Leu54 might play a significant role in TBa allergenity.

Key words: tartary buckwheat, allergen, site-directed mutagenesis, immunological activity

中图分类号:

Q78
R392

任晓霞1，张昕2，崔晓东1，李玉英1，王转花1,*. 苦荞过敏原TBa 的表位突变及免疫活性鉴定[J]. 食品科学, 2010, 31(13): 169-173.

REN Xiao-xia1，ZHANG Xin2，CUI Xiao-dong1，LI Yu-ying1，WANG Zhuan-hua1,*. Immunological Characterization and Mutational Analysis of Allergen TBa in Tartary Buckwheat[J]. FOOD SCIENCE, 2010, 31(13): 169-173.

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苦荞过敏原TBa 的表位突变及免疫活性鉴定

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