实时荧光RT-PCR检测贝类中的札幌病毒

doi:10.7506/spkx1002-6300-200920074

食品科学 ›› 2009, Vol. 30 ›› Issue (20): 336-339.doi: 10.7506/spkx1002-6300-200920074

实时荧光RT-PCR检测贝类中的札幌病毒

邓恬宁¹，潘良文²,*，吕蓉²，高琴²，张舒亚²，卢钟山²

1.华东理工大学生物工程学院 2.上海出入境检验检疫局

收稿日期:2009-01-15 修回日期:2009-07-06 出版日期:2009-10-15 发布日期:2010-12-29
通讯作者: 潘良文 E-mail:panlw888@126.com
基金资助:
科技部世博科技专项(2009BAK43B31)；国家质量技术检验检疫总局科研项目(2007B150)
上海市技术贸易壁垒研究项目(07TBT003)

Fluorescent RT-PCR Assay for Detection of Sapovirus in Shellfish

DENG Tian-ning1，PAN Liang-wen2,*，LU Rong2，GAO Qin2，ZHANG Shu-ya2，LU Zhong-shan2

1. School of Bioengineering, East China University of Science and Technology, Shanghai 200237, China ；
2. Shanghai Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Shanghai 200135, China

Received:2009-01-15 Revised:2009-07-06 Online:2009-10-15 Published:2010-12-29
Contact: PAN Liang-wen E-mail:panlw888@126.com

摘要/Abstract

摘要：

建立检测贝类中GⅠ、GⅡ、GⅣ和GⅤ型札幌病毒的实时荧光RT-PCR新方法。首先使用PEG 8000对贝类中的札幌病毒进行富集，然后采用Tri-reagent提取材料中的总RNA，针对札幌病毒RNA 3'端含Poly A尾的特点，使用带有Poly(dT)25的磁珠对病毒RNA进行纯化，用所获的高纯度RNA进行四种型别札幌病毒的实时荧光RT-PCR检测。该方法高效、灵敏，检测下限为101数量级拷贝，能够用于日常检验。

关键词: 札幌病毒, 实时荧光RT-PCR, 检测

Abstract:

In order to detect GI, GII, GIV and GV sapoviruses in shellfish, a fluorescent real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) asssy was developed. sapoviruses in shellfish were concentrated using polyethylene glycol 8000 (PEG 8000) first. Total RNA of sapoviruses from Shellfish were extracted with Tri-reagent and purified with Poly(dT)25 magnetic beads due to its 3’ Poly(A) tails. Four genotypes of RNA with high purity were determined using the fluorescent RT-PCR assay. This method is effective and sensitive to obtain 101 copies as the limit of detection. Therefore, this fluorescent RT-PCR can be used in daily detection.

Key words: sapovirus, RT-PCR, detection

中图分类号:

R155.5

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