MPCR检测食品中大肠杆菌O157和单核增生李斯特氏菌的研究

doi:10.7506/spkx1002-6300-200920084

食品科学 ›› 2009, Vol. 30 ›› Issue (20 ): 375-378.doi: 10.7506/spkx1002-6300-200920084

MPCR检测食品中大肠杆菌O157和单核增生李斯特氏菌的研究

丁久法¹，潘迎捷¹，赵勇¹,*，孙晓红¹，秦红友²，唐明未²

1.上海海洋大学食品学院 2.上海生物芯片有限公司

收稿日期:2009-07-01 出版日期:2009-10-15 发布日期:2010-12-29
通讯作者: 赵勇

MPCR Assay for Detection of Escherichia coli O157 and Listeria monocytohenes in Foodstuffs

DING Jiu-fa1，PAN Ying-jie1，ZHAO Yong1,*，SUN Xiao-hong1，QIN Hong-you2，TANG Ming-wei2

1. College of Food Science and Technology, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China ；
2. Shanghai Biochip Co. Ltd., Shanghai 201203, China

Received:2009-07-01 Online:2009-10-15 Published:2010-12-29
Contact: ZHAO Yong

摘要/Abstract

摘要：

根据大肠杆菌O157(Escherichia coli O157，E. coli O157)的志贺样毒素基因slt和“黏附抹平”因子eaeA基因、单核增生李斯特氏菌(Listeria monocytohenes，LM)的编码溶血素O的hlyA基因和毒力基因plcA，分别设计上游和下游的slt、eaeA、hlyA和plcA四对引物，对应扩增片段依次为780、450、708、600bp。通过对单管多重PCR(multiplex PCR，MPCR)扩增的特异性、敏感性分析以及对单管多重PCR扩增条件，如Mg2+浓度、dNTPs浓度和退火温度等的优化，建立快速检测大肠杆菌O157和单增李斯特菌的多重PCR方法，该方法能同时检测到0.50ng的E. coliO157和单增李斯特菌基因组DNA，并且操作简便、快速，具有良好的敏感性和特异性，能够快速实现对食品中多种致病菌的诊断和监控。

关键词: 多重PCR, 大肠杆菌O157, 单核增生李斯特氏菌

Abstract:

Four pairs of primers were designed according to Shiga-like toxin gene (slt) and adhesion factor gene (eaeA) from Escherichia coli O157, hemolysis O encoding gene (hlyA) and virulence gene (plcA) from Listeria monocytohenes, as slt-F/slt-R, eaeA-F/eaeA-R, hlyA-F/hlyA-R and plcA-F/plcA-R, respectively. The corresponding PCR products were 780, 450, 708 and 600 bp, respectively. A multiplex PCR (MPCR) method was developed to detect E. coli O157 and Listeria monocytohenes. The optimal conditions including Mg2+ concentration, dNTPs and anneal temperature for MPCR were investigated. Along with this, the specificity and sensitivity of the method were monitored. Under optimized conditions, the detection limit for DNA template was 0.50 ng for both E. coli O157 and Listeria monocytohenes. The specific and sensitive detection for E. coli O157 and Listeria monocytohenes in food industry can be achieved by using this method.

Key words: multiplex polymerase chain reaction (MPCR), Escherichia coli O157, Listeria monocytohenes

中图分类号:

Q503

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MPCR检测食品中大肠杆菌O157和单核增生李斯特氏菌的研究

MPCR Assay for Detection of Escherichia coli O157 and Listeria monocytohenes in Foodstuffs

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