冷却猪肉不同前处理对细菌DNA提取及PCR-DGGE的影响

doi:10.7506/spkx1002-6630-201006062

食品科学 ›› 2010, Vol. 31 ›› Issue (6): 258-262.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201006062

冷却猪肉不同前处理对细菌DNA提取及PCR-DGGE的影响

江芸^1,2，高峰¹，徐幸莲¹，叶可萍¹，周光宏^1,*

1.南京农业大学国家肉品质量安全控制工程技术研究中心 2.南京师范大学金陵女子学院

收稿日期:2009-05-31 出版日期:2010-03-15 发布日期:2010-12-29
通讯作者: 周光宏 E-mail:ghzhou@njau.edu.cn
基金资助:
国家“863”计划重点项目(2008AA100804)；江苏省高校自然科学基础研究项目(08KJB550005)；
上海市科委重大攻关项目(07dz19508)

Dilution-PCR and PCR-DGGE for Evolution of Effect of Pre-treatment Methods on Extraction of Bacterial DNA from Chilled Pork

JIANG Yun1,2，GAO Feng1，XU Xing-lian1，YE Ke-ping1，ZHOU Guang-hong1,*

1. National Center of Meat Quality and Safety Control, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China；
2. Ginling College, Nanjing Normal University, Nanjing 210097, China

Received:2009-05-31 Online:2010-03-15 Published:2010-12-29
Contact: ZHOU Guang-hong1,* E-mail:ghzhou@njau.edu.cn

摘要/Abstract

摘要：

比较研究冷却猪肉不同前处理对细菌DNA 提取及PCR- 变性梯度凝胶电泳(DGGE)的影响。冷却猪肉4℃贮藏至第5 天时，分别采用冻融、超声、摇床和匀浆前处理后，提取细菌DNA，进行Dilution-PCR 和DGGE 分析。结果表明，不同前处理方法所制备的DNA 量稍有差别，但对PCR-DGGE 结果无显著影响，故可根据实际情况选择上述不同前处理方法。同时对16S rDNA V3 区的DGGE 图谱进行割胶测序，检测到腐败菌主要是假单胞菌属，其他还有不动杆菌属、环丝菌属和沙雷氏菌属。

关键词: 冷却猪肉, 前处理方法, 细菌, DNA 提取, PCR- 变性梯度凝胶电泳

Abstract:

Dilution-PCR and PCR-DGGE were used to evaluate effect of four pre-treatment methods such as freeze-thaw, ultrasonification, shake and homogenization on extraction of bacterial DNA from chilled pork in this study. After 4 days of storage at 4 ℃, chilled pork was subjected to pre-treatment by the above methods for bacterial DNA extraction followed by dilution- PCR and PCR-DGGE analyses. Results showed that four pretreatment methods results in a slight difference in bacterial DAN yield but had no notable effect on PCR-DGGE analysis. Therefore, these pretreatment methods could be chosen according to actual requirement. Sequence analysis of DGGE bands of 16S rRNA gene V3 region showed that the predominant spoilage bacterium in chilled pork was Pseudomonas and others including Acinetobacter, Brochothrix, and Serratia were also detected.

Key words: chilled pork, pre-treatment methods, bacteria, DNA extraction, PCR-DGGE

中图分类号:

TS251.51

江芸1,2，高峰1，徐幸莲1，叶可萍1，周光宏1,*. 冷却猪肉不同前处理对细菌DNA提取及PCR-DGGE的影响[J]. 食品科学, 2010, 31(6): 258-262.

JIANG Yun1,2，GAO Feng1，XU Xing-lian1，YE Ke-ping1，ZHOU Guang-hong1,*. Dilution-PCR and PCR-DGGE for Evolution of Effect of Pre-treatment Methods on Extraction of Bacterial DNA from Chilled Pork[J]. FOOD SCIENCE, 2010, 31(6): 258-262.

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冷却猪肉不同前处理对细菌DNA提取及PCR-DGGE的影响

Dilution-PCR and PCR-DGGE for Evolution of Effect of Pre-treatment Methods on Extraction of Bacterial DNA from Chilled Pork

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