Taqman-MGB探针RT-PCR方法检测食品中脊髓灰质炎病毒

doi:10.7506/spkx1002-6630-201010041

食品科学 ›› 2010, Vol. 31 ›› Issue (10): 200-205.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201010041

Taqman-MGB探针RT-PCR方法检测食品中脊髓灰质炎病毒

李想¹,黄一^1.2,潘良文¹,卢钟山¹,张舒亚¹,吕蓉¹,刘月明¹,高琴¹

1. 上海出入境检验检疫局
2.华东理工大学生物工程学院

收稿日期:2009-08-10 出版日期:2010-05-15 发布日期:2010-12-29
通讯作者: 潘良文 E-mail:panlw888@126.com
基金资助:
上海技术标准专项(07DZ05026)；国家质检总局科研项目(2007B150)；科技部世博科技专项(2009BAK43B31)；
上海市科委创新平台服务项目(10DZ2294102)

Detection of Polioviruses in Foodstuffs by Real-time RT-PCR Based on Taqman-MGB Probe

LI Xiang1，HUANG Yi1,2，PAN Liang-wen1,*，LU Zhong-shan1，ZHANG Shu-ya1， LU Rong1，LIU Yue-ming1，GAO Qin1

1. Shanghai Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Shanghai 200135, China；
2. School of Bioengineering, East China University of Science and Technology, Shanghai 200237, China

Received:2009-08-10 Online:2010-05-15 Published:2010-12-29
Contact: PAN Liang-wen E-mail:panlw888@126.com

摘要/Abstract

摘要：

目的：建立食品中脊髓灰质炎病毒Taqman-MGB 探针实时荧光RT-PCR 检测方法。方法：在脊髓灰质炎病毒基因组2A 区设计引物和探针，对3 种血清型脊髓灰质炎病毒进行单独和同时检测。通过参照分子建立标准曲线，对人工接种病毒的牡蛎、蓝莓、生菜和水食品样品进行检测。结果：建立的检测体系分别高度特异于相应血清型病毒检测，对3 种血清型脊髓灰质炎病毒进行单独和同时检测的下限均为2 拷贝参照分子DNA。基于参照分子建立的4 条标准曲线具有很好线性关系(R2 ＝ 0.999)和较高反应效率(1.01～1.04)。对4 种食品样品的分析表明，建立的实时荧光RT-PCR 方法可稳定检测到各添加浓度脊髓灰质炎病毒。结论：建立的Taqman-MGB 探针实时荧光RT-PCR 检测体系适于食品中脊髓灰质炎病毒的检测。

关键词: 脊髓灰质炎病毒, 实时荧光RT-PCR, Taqman-MGB 探针, 食品, 参照分子

Abstract:

This study was aimed to develop three sero-specific real-time RT-PCR detection systems based on Taqman-MGB probes for the assay of polioviruses in foodstuffs. Primer and Taqman-MGB probe sets based on the 2A region of poliovirus genome were designed to detect three serotypes of polioviruses separately and simultaneously. Four artificially inoculated food samples, including oyster, blueberry, lettuce and water were analyzed based on the established standard curves using three reference molecules as calibrators. Sensitivity tests suggested that at least 2 copies of the reference molecule DNA could be stably detected both in the separate and simultaneous detection systems. Good linearity with the correlation coefficient above 0.999 and high reaction efficiency (1.01 － 1.04) were observed in four standard curves employing serially diluted reference molecule DNA as the calibrator. Three serotypes of polioviruses in four inoculated samples were successfully detected using the established real-time RT-PCR detection systems. The developed real-time RT-PCR detection systems based on Taqman-MGB probes are most suitable for polioviruses detection in foodstuffs.

Key words: polioviruses, rea1-time RT-PCR, Taqman-MGB probe, foodstuffs, reference molecule

中图分类号:

李想1，黄一1,2，潘良文1,*，卢钟山1，张舒亚1，吕蓉1，刘月明1，高琴1. Taqman-MGB探针RT-PCR方法检测食品中脊髓灰质炎病毒[J]. 食品科学, 2010, 31(10): 200-205.

LI Xiang1，HUANG Yi1,2，PAN Liang-wen1,*，LU Zhong-shan1，ZHANG Shu-ya1， LU Rong1，LIU Yue-ming1，GAO Qin1. Detection of Polioviruses in Foodstuffs by Real-time RT-PCR Based on Taqman-MGB Probe[J]. FOOD SCIENCE, 2010, 31(10): 200-205.

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Taqman-MGB探针RT-PCR方法检测食品中脊髓灰质炎病毒

Detection of Polioviruses in Foodstuffs by Real-time RT-PCR Based on Taqman-MGB Probe

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