重组水稻 α-半乳糖苷酶的分离纯化及酶学性质研究

doi:10.7506/spkx1002-6630-201021068

食品科学 ›› 2010, Vol. 31 ›› Issue (21): 304-307.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201021068

重组水稻 α-半乳糖苷酶的分离纯化及酶学性质研究

李苏红¹，朱旻鹏¹，李拖平^{2 ,*}

1.沈阳师范大学工程技术学院
2.辽宁大学轻型产业学院

收稿日期:2010-06-29 出版日期:2010-11-15 发布日期:2010-12-29
通讯作者: 李拖平 E-mail:ltp0401@126.com
基金资助:
辽宁省科技厅博士科研启动资助项目(20081031)；教育部归国留学人员科研启动基金项目

Isolation, Purification and Characterization of Recombinantα-Galactosidase from Rice

LI Su-hong1，ZHU Min-peng1，LI Tuo-ping2,*

1. College of Engineering and Technology, Shenyang Normal University, Shenyang 110034, China；
2. College of Light Industry, Liaoning University, Shenyang 110036, China

Received:2010-06-29 Online:2010-11-15 Published:2010-12-29
Contact: LI Tuo-ping2 E-mail:ltp0401@126.com

摘要/Abstract

摘要：

对重组水稻α- 半乳糖苷酶的分离纯化及其酶学性质进行研究。结果表明：该重组酶分子质量约为59kD；最适酶反应温度为45℃，最适pH 值为5.0；酶活力在0～20℃，pH4.0～7.0 最为稳定；酶学动力学常数Km 为0.78mmol/L，Vmax 为10.16mmol/(mg·min)。多数的金属离子和有机离子对酶催化作用没有影响，Hg2+、Ag+及－ SH 基团抑制剂p-chloromercuribenzoic acid(pCMB)对酶活性有强烈抑制作用。

关键词: 重组, &alpha, - 半乳糖苷酶, 纯化, 酶学性质

Abstract:

A crude enzyme solution rich in recombinant riceα-galactosidase from the engineering strain E. coli pET-32a (+)- Gal/ Origami DE obtained from our laboratory was prepared and purified on a Ni-Sepharose affinity column. The purifiedα- galactosidase showed a single protein band in SDS-PAGE with a molecular mass of 59 kD. This enzyme exhibited the highest activity at the conditions of pH 5.0 and 45 ℃. Meanwhile, it showed the best stability at pH 4.0－7.0 and 0－20 ℃. The kinetic parameters Km and Vmax were 0.78 mmol/L and 10.16 mmol/(mg·min), respectively. Most of metal and organic ions did not affect the activity of this enzyme. However, Ag+, Hg2+ and pCMB (p-chloromercuribenzoic acid) significantly decreased its activity by 84%, 87% and 92%, respectively.

Key words: recombinant, α-galactosidase, purification, enzymatic characterization

中图分类号:

TS201.2

李苏红1，朱旻鹏1，李拖平2,*. 重组水稻 α-半乳糖苷酶的分离纯化及酶学性质研究[J]. 食品科学, 2010, 31(21): 304-307.

LI Su-hong1，ZHU Min-peng1，LI Tuo-ping2,*. Isolation, Purification and Characterization of Recombinantα-Galactosidase from Rice[J]. FOOD SCIENCE, 2010, 31(21): 304-307.

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重组水稻 α-半乳糖苷酶的分离纯化及酶学性质研究

Isolation, Purification and Characterization of Recombinantα-Galactosidase from Rice

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