食品科学 ›› 2020, Vol. 41 ›› Issue (12): 292-297.doi: 10.7506/spkx1002-6630-20190218-091
徐蕾蕊,马丹,魏咏新,李丹,魏海燕,刘莉,张西萌,汪琦,付溥博,赵晓娟,曾静
XU Leirui, MA Dan, WEI Yongxin, LI Dan, WEI Haiyan, LIU Li, ZHANG Ximeng, WANG Qi, FU Pubo, ZHAO Xiaojuan, ZENG Jing
摘要: 目的:建立A群轮状病毒(rotavirus,RV)一步法反转录微滴式数字聚合酶链式反应(reverse transcriptase droplet digital polymerase chain reaction,RT-ddPCR)方法。方法:筛选特异性引物探针,建立并优化一步法RT-ddPCR方法,确定特异性;制备含A群RV目的片段的RNA标准物质,确定建立方法的检测限、准确度、重复性和复现性。A群RV阳性粪便样品梯度稀释后制作染毒液,制备人工染毒样品,分离病毒与食品基质,浓缩得到病毒悬液,提取RNA后,比较不同食品基质中一步法RT-ddPCR检测结果。结果:建立的一步法RT-ddPCR方法定量限为58 000.00~5.80 拷贝/μL,具有良好的特异性、准确性、灵敏度、重复性和复现性。各染毒水平下A群RV检出量和回收率在不同食品基质中存在显著性差异(P<0.05)。结论:研究建立的一步法RT-ddPCR方法可准确定量A群RV RNA,食品基质可影响一步法RT-ddPCR检测结果,通过病毒回收率可计算食品中A群RV的实际载量。
中图分类号: