张 良,杨 松,何剑为,邹志远,贾丽娇,蒋 坤,孟宪军,张慧丽
ZHANG Liang,YANG Song,HE Jian-wei,ZOU Zhi-yuan,JIA Li-jiao,JIANG Kun,MENG Xian-jun,ZHANG Hui-li
摘要:
目的:半胱氨酸酶抑制剂(cC)L68Q突变后能够以二聚体开始进一步产生类淀粉样聚集。研究姜黄素对基因重组突变cC的毕赤酵母Pichia pastoris X-33表达菌的生长和分泌的影响,以及抑制突变cC的类淀粉样聚集的作用。方法:采用响应面法优化姜黄素的提取工艺,通过液体比浊法探究姜黄素对基因重组菌株生长抑制的作用,通过SDS-PAGE研究不同浓度的姜黄素对cC的分泌的作用,通过刚果红染色法研究姜黄素对cC蛋白聚集的抑制作用。结果:由Design-Expert响应面分析软件得到姜黄素最佳提取条件为:液固比30:1(mL/g)、超声功率300W、提取时间15min,此条件下提取率达3.97mg/g。姜黄素对重组菌体生长的抑制作用的相对稳定,但随着姜黄素添加量的增加,其对蛋白分泌量和聚集沉淀量均抑制明显。结论:姜黄素对基因重组cC的生长、分泌和聚集有抑制作用。