食品科学 ›› 2018, Vol. 39 ›› Issue (2): 66-72.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201802011
孙文敬1,2,杨荔1,栾方1,何小用1,崔凤杰1,2,*,王大明2,3,钱静亚1,2,齐向辉1
SUN Wenjing1,2, YANG Li1, LUAN Fang1, HE Xiaoyong1, CUI Fengjie1,2,*, WANG Daming2,3, QIAN Jingya1,2, QI Xianghui1
摘要: 采用降落聚合酶链式反应(touchdown polymerase chain reaction,TD-PCR)技术,从2-酮基葡萄糖酸工业生产菌株变形假单胞菌JUIM01中克隆了编码2-酮基葡萄糖酸差向异构酶的基因kguE。将目的基因与质粒pET-28a(+)重组后转入宿主表达菌中,获得了重组菌株大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a(+)-kguE。在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷的诱导下,该重组菌株表达了一个分子质量约为30.5?ku的融合蛋白,且该蛋白的Western-blot鉴定结果显示为阳性。生物信息学分析结果表明,该蛋白是一种由256?个氨基酸残基组成的分子质量为28.5?ku的亲水性蛋白,与恶臭假单胞菌的2-酮基葡萄糖酸差向异构酶在氨基酸序列上的一致性达78%,定位于细胞质中,其二级结构中α-螺旋、延伸链和无规则卷曲所占的比例分别为40.62%、17.19%和42.19%。本研究结果为变形假单胞菌2-酮基葡萄糖酸差向异构酶的功能研究提供了一定理论支持。
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