食品科学 ›› 2019, Vol. 40 ›› Issue (20): 325-331.doi: 10.7506/spkx1002-6630-20180830-332
郭建平,万佳佳,陆兆新,吕凤霞,张充,赵海珍,别小妹
GUO Jianping, WAN Jiajia, LU Zhaoxin, Lü Fengxia, ZHANG Chong, ZHAO Haizhen, BIE Xiaomei
摘要: 应用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立基于颜色判定的快速、灵敏的金黄色葡萄球菌检测方法。根据金黄色葡萄球菌特异性靶基因SAR0395设计LAMP引物,建立可视化LAMP检测方法。优化的反应体系为:1.6 μmol/L内引物(FIP和BIP),0.2 μmol/L外引物(F3和B3),4.0 mmol/L MgSO4,1.0 mmol/L dNTPs,0.4 U/μL Bst 2.0 WarmStart? DNA聚合酶,120 μmol/L羟基萘酚蓝,扩增温度60 ℃,扩增时间60 min。在可视化LAMP体系中添加两条环引物(LF和LB)反应时间可缩短至20 min。该可视化LAMP反应60 min,其基因组灵敏度可以达到0.010 3 fg/μL,菌落灵敏度可以达到1.9 CFU/mL;利用46 株金黄色葡萄球菌和24 株非金黄色葡萄球菌证实该可视化LAMP具有良好的特异性和可靠性。本研究中建立的可视化LAMP可为金黄色葡萄球菌的快速检测提供一种新的技术。
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