食品科学 ›› 2019, Vol. 40 ›› Issue (4): 160-169.doi: 10.7506/spkx1002-6630-20180104-044
郭双双,郑芳芳,可丛雪,王子龙,韦宇拓,黄日波,杜丽琴*
GUO Shuangshuang, ZHENG Fangfang, KE Congxue, WANG Zilong, WEI Yutuo, HUANG Ribo, DU Liqin*
摘要: 克隆表达乳酸片球菌AS1.2696菌株中的α-L-鼠李糖苷酶基因,研究重组酶的酶学性质。分析乳酸片球菌AS1.2696菌株的全基因组序列,聚合酶链式反应扩增目的基因,以pSE380为表达载体构建重组质粒pSE-prha2和pSE-prha3,在大肠杆菌Escherichia coli XL-blue进行表达,使用镍亲和层析纯化重组蛋白,研究重组酶PRHA2、PRHA3的酶学性质。结果表明,重组酶PRHA2的最适pH值和温度分别为5.0和60?℃,Km值为(3.039±0.581)mmol/L,Vmax值为(2.032±0.186)μmol/(min·mg);PRHA3的最适pH值和温度分别为5.5和45?℃,Km值为(2.797±0.132)mmol/L,Vmax?值为(113.35±1.485)μmol/(min·mg)。PRHA2和PRHA3能够水解人工底物对硝基苯基-α-L-吡喃鼠李糖苷(p-nitrophenyl-α-L-rhamnopyranoside,pNPR)以及α-1,6键的橙皮苷、芦丁;PRHA2对4-硝基苯基-β-D-阿拉伯糖苷(4-nitrophenyl-β-L-arabinoside,pNPA)有一定的水解活性;PRHA3对淫羊藿苷、淫羊藿次苷I、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C这几种物质C-7位的葡萄糖糖苷键有较弱的水解作用。此外,PRHA3能够水解朝藿定C的C-3位以α-Rha(2→1)α-Rha连接的外侧的鼠李糖苷键,在食品及医疗方面具有一定的应用价值。
中图分类号: