食品科学 ›› 2010, Vol. 31 ›› Issue (5): 141-146.doi: 10.7506/spkx1002-6300-201005032
张 颋1,冯延叶1,沈亚领1,金维荣2,杨 忠1,王菊芳3,王小宁1 , 3 ,*
ZHANG Ting1,FENG Yan-ye1,SHEN Ya-ling1,JIN Wei-rong2,YANG Zhong1,WANG Ju-fang3,WANG Xiao-ning1,3,*
摘要:
为提高常规稀释复性方法的复性效率,以重组绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)包涵体为模型,开发一种新的双变性- 稀释复性方法。新方法选取含有精氨酸的碱性复合溶液作为第一变性剂溶解GFP 包涵体,通过梯度降低变性液的酸碱度析出溶解目的蛋白,再以尿素为第二变性剂溶解析出的蛋白,随后进行稀释复性。结果显示:与常规方法比,新方法复性的绿色荧光蛋白活性收率提高至1.5~2.3 倍,复性蛋白对温度、溶液酸碱度及变性剂的稳定性提高。增强型绿色荧光蛋白(enhanced GFP,EGFP)及其融合蛋白的包涵体采用新方法进行复性,均取得80% 以上的活性回收率,说明新方法对GFP 系列融合蛋白的包涵体具有一定的适用性。新方法从变性剂使用与包涵体结构的关系出发,突破常规操作中变性剂单次使用的局限,既保留了简便性又提高了常规稀释复性方法的效率。
中图分类号: