米曲霉pyrG 基因克隆及其同源转化系统的建立

doi:10.7506/spkx1002-6630-201011043

食品科学 ›› 2010, Vol. 31 ›› Issue (11): 202-205.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201011043

米曲霉pyrG 基因克隆及其同源转化系统的建立

王金良，陈宏文*

华侨大学工业生物技术福建省高等学校重点实验室

收稿日期:2009-10-14 出版日期:2010-06-01 发布日期:2010-12-29
通讯作者: 陈宏文 E-mail:chenhw@hqu.edu.cn
基金资助:
福建省自然科学基金项目(D0810015)；福建省高等学校新世纪优秀人才支持计划项目(07FJRC03)

pyrG Gene Cloning and Establishment of Homologous Transformation System for Aspergillus oryzae

WANG Jin-liang，CHEN Hong-wen*

Key Laboratory of Industrial Biotechnology of Fujian Province University, Huaqiao University, Quanzhou 362021, China

Received:2009-10-14 Online:2010-06-01 Published:2010-12-29
Contact: CHEN Hong-wen E-mail:chenhw@hqu.edu.cn

摘要/Abstract

摘要：

建立以乳清酸核苷-5＇- 磷酸脱羧酶基因(pyrG)为选择标志，以米曲霉为宿主菌的同源转化系统。以米曲霉基因组为模板，通过PCR 扩增获得pyrG 基因，将该片段与表达载体pMD18-T 相连，转化大肠杆菌DH 5α，经蓝白斑筛选、PCR 快速筛选、酶切和测序验证，获得重组质粒pMD-pyrG，完成pyrG 基因的克隆。序列分析表明该基因与米曲霉KBN616 的pyrG 基因编码序列的同源性为99.9%，两者经推导的氨基酸的同源性为99.6%。以米曲霉 pyrG 营养缺陷株为受体菌，通过PEG/CaCl2 诱导的原生质体转化方法，将重组质粒导入该受体菌，使米曲霉pyrG 缺陷株发生基因转化，成为pyrG+，由此成功建立了以pyrG 为筛选标记基因、同型米曲霉pyrG 基因缺陷株为受体菌的基因转化系统。

关键词: 重组质粒, 克隆, 同源转化系统

Abstract:

The present paper reports the establishment of homologous transformation system for Aspergillus oryzae based on pyrG gene as the selective marker. pyrG gene was amplified by PCR with A. oryzae genome as a template and connected with pMD-18T vector. The product was transformed into E. coli DH 5α. Recombinant plasmid pMD-pyrG was verified according to blue-white screening, PCR fast screening, enzyme digestion and sequence identification. Sequence analysis exhibited 99.9 % homology with the pyrG gene of A. oryzae KNB 616. The deduced homology for amino acids was 99.6 %. Transformation of A. oryzae pyrG－ mutant with recombinant plasmid pMD-pyrG by PEG/CaCl2 method could result in its genetic transformation to become pyrG+ mutant. The establishment of homologous transformation system for A. oryzae makes it possible to introduce exogenous gene and analyze its function in the future.

Key words: recombinant plasmid, cloning, homologous transformation system

中图分类号:

Q785

王金良，陈宏文*. 米曲霉pyrG 基因克隆及其同源转化系统的建立[J]. 食品科学, 2010, 31(11): 202-205.

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