食品科学 ›› 2023, Vol. 44 ›› Issue (10): 150-157.doi: 10.7506/spkx1002-6630-20220429-391
廖清,郑俊威,王斌,潘力
出版日期:
2023-05-25
发布日期:
2023-06-02
基金资助:
LIAO Qing, ZHENG Junwei, WANG Bin, PAN Li
Online:
2023-05-25
Published:
2023-06-02
摘要: 规律间隔成簇短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(CRISPR-associated protein 9,Cas9)主要元件Cas9蛋白一般采用大肠杆菌表达,但在表达纯化过程中易出现形成包涵体形式的不溶解性蛋白,内毒素含量高、蛋白过大导致蛋白折叠不正确、产量低等问题。为实现化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes)Cas9蛋白(SpCas9)在大肠杆菌中的高效可溶表达,进一步促进其应用及编辑技术的推广,本研究应用GB1促溶标签提高Cas9蛋白表达量及溶解度,同时通过使用多重启动子策略进一步提高了Cas9蛋白表达量。两种策略的组合使Cas9蛋白表达量提升了2.52 倍。体外酶切分析显示融合GB1标签的Cas9蛋白功能活性不受影响。进一步组装RNP复合物转化黑曲霉宿主成功破坏了pyrG基因。
中图分类号:
廖清,郑俊威,王斌,潘力. SpCas9蛋白的高效可溶表达及应用[J]. 食品科学, 2023, 44(10): 150-157.
LIAO Qing, ZHENG Junwei, WANG Bin, PAN Li. Efficient Soluble Expression and Application of SpCas9 Protein[J]. FOOD SCIENCE, 2023, 44(10): 150-157.
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