乳酸菌饮料中嗜酸乳杆菌的实时荧光定量PCR检测方法

doi:10.7506/spkx1002-6630-20180123-301

食品科学 ›› 2019, Vol. 40 ›› Issue (8): 27-32.doi: 10.7506/spkx1002-6630-20180123-301

乳酸菌饮料中嗜酸乳杆菌的实时荧光定量PCR检测方法

张娜娜，刘洋，俞漪，赵渝，窦同海，徐琼，段文锋，翁史昱

1.上海市质量监督检验技术研究院，国家食品质量监督检验中心（上海），上海 200233；2.上海师范大学生命与环境科学学院，上海 200234；3.复旦大学生命科学学院，上海 200438；4.上海市质量管理科学研究院（上海），上海 200050

出版日期:2019-04-25 发布日期:2019-05-05
基金资助:
国家自然科学基金青年科学基金项目（31301486）；上海市自然科学基金项目（13ZR1439600）；国家质量监督检验检疫总局科研项目（2017QK167）

Real-Time Fluorescent Quantitative PCR Method for Detection of Lactobacillus acidophilus in Probiotic Beverages

ZHANG Nana, LIU Yang, YU Yi, ZHAO Yu, DOU Tonghai, XU Qiong, DUAN Wenfeng, WENG Shiyu

1. Shanghai Institute of Quality Inspection and Technical Research, National Center of Supervision and Inspection on Food Products Quality (Shanghai), Shanghai 200233, China; 2. College of Life and Environmental Sciences, Shanghai Normal University, Shanghai 200234, China; 3. College of Life Sciences, Fudan University, Shanghai 200438, China; 4. Shanghai Academy of Quality Management (Shanghai), Shanghai 200050, China

Online:2019-04-25 Published:2019-05-05

摘要/Abstract

摘要： 目的：为快速准确检测乳酸菌饮料中的嗜酸乳杆菌，建立实时荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）检测方法。方法：根据嗜酸乳杆菌NCFM的SPIDR保守区域设计特异性引物与探针，借助建立的实时荧光定量PCR方法进行特异性、灵敏度、重复性以及抗干扰能力验证，并利用模拟样品对方法进行检验，最后对市售的实际样品进行检测。结果：该方法的特异性较好；方法的绝对灵敏度达到3pg，相对灵敏度达103 CFU/mL；重复性检测表明相对标准偏差在2.6%以下。同时进行杂菌干扰实验，在纯基因组水平和培养物水平混合大肠杆菌，扩增均无明显影响，表明建立的方法抗干扰能力较好。利用建立的实时荧光定量PCR方法对模拟样品进行检测并建立标准曲线，得出R2为0.987，线性较好，可进行实际样品的检测。对市售的11 份样品进行检测，其中6 份含有嗜酸乳杆菌菌株，5份不含嗜酸乳杆菌菌株，标记嗜酸乳杆菌的样品全部检测出嗜酸乳杆菌且含量在5.83×102～3.68×104 CFU/mL之间。结论：建立的实时荧光定量PCR方法可快速、准确地检测出乳酸菌饮料中嗜酸乳杆菌。

关键词: 实时荧光定量PCR, 嗜酸乳杆菌, 定量, 检测

Abstract: Objective: To establish a real-time fluorescent quantitative PCR assay for the rapid and accurate detection of Lactobacillus acidophilus in probiotic beverages. Methods: Specific primers and probes were designed based on the conserved SPIDR region of L. acidophilus NCFM. The established method was assessed with respect to specificity, sensitivity and reproducibility, and it was applied to model and commercial samples. Results: The method had good specificity. The absolute sensitivity was 3 pg and the relative sensitivity was 103 CFU/mL. The repeatability expressed as relative standard deviation (RSD) was below 2.6%. At the same time, the amplification was not affected by the coexistence of pure genome or culture of Escherichia coli, indicating that the method has good anti-interference ability. This method showed good linearity (R2 = 0.987) and it was feasible to detect actual samples. Of 11 commercial samples, 6 contained L. acidophilus strains while the rest did not. L. acidophilus was detected in all samples labeled with L. acidophilus in the range of 5.83 × 102 to 3.68 × 104 CFU/mL. Conclusion: The real-time fluorescence quantitative PCR method can quickly and accurately detect L. acidophilus in probiotic beverages.

Key words: real-time fluorescence quantitative PCR, Lactobacillus acidophilus, quantitative, detection

中图分类号:

Q93.331

张娜娜，刘洋，俞漪，赵渝，窦同海，徐琼，段文锋，翁史昱. 乳酸菌饮料中嗜酸乳杆菌的实时荧光定量PCR检测方法[J]. 食品科学, 2019, 40(8): 27-32.

ZHANG Nana, LIU Yang, YU Yi, ZHAO Yu, DOU Tonghai, XU Qiong, DUAN Wenfeng, WENG Shiyu. Real-Time Fluorescent Quantitative PCR Method for Detection of Lactobacillus acidophilus in Probiotic Beverages[J]. FOOD SCIENCE, 2019, 40(8): 27-32.

[1]	田林双，顾鹏程，吴存兵，徐澳，豆雪梅，史凤珍，陈飞. 小麦粉及其制品中偶氮甲酰胺检测方法研究进展[J]. 食品科学, 2021, 42(9): 347-354.
[2]	李伊宁，黄昆仑，姚志轶. 用于叶酸检测的荧光传感器构建及应用研究进展[J]. 食品科学, 2021, 42(9): 214-221.
[3]	谭贵良，潘子强，张世伟，胡敏，冯荣虎，杨懋勋. 肉眼读取-荧光微球竞争免疫层析法半定量快速检测保健食品中的西布曲明[J]. 食品科学, 2021, 42(8): 313-318.
[4]	熊晓通，胡峰，尤小龙，尹艳艳，陈明学，程平言，钟方达. 超高效液相色谱-高分辨质谱测定白酒中氨基甲酸乙酯含量[J]. 食品科学, 2021, 42(8): 283-287.
[5]	宁亚维，刘茁，杨正，马俊美，范素芳，李强，张岩. UPLC-MS/MS法同时检测食品中3种主要牛奶过敏原[J]. 食品科学, 2021, 42(8): 270-276.
[6]	王玥，邵琳，李乾学，易乐，曲晗，王洪利，沈明浩. 适配体结合量子点技术同时检测金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌O157:H7方法[J]. 食品科学, 2021, 42(8): 305-312.
[7]	田景升，李东东，赵玲钰，高文惠. 喹乙醇印迹传感器的制备及其在喹噁啉类药物残留快检中的应用[J]. 食品科学, 2021, 42(6): 316-324.
[8]	杨飞艳，辜雪冬，孙术国，罗章，谢司伟，黄文阳. 基于同位素标记相对和绝对定量技术研究藏香猪冷鲜肉冰温保鲜分子机制[J]. 食品科学, 2021, 42(5): 46-54.
[9]	刘娜，曹强，肖雨诗，黄蓉，程雷，刘欢，韩刚，李晋成，李梦龙，吴立冬. 基于多巴胺及其衍生物的传感器在食品快速检测中的研究进展[J]. 食品科学, 2021, 42(5): 332-339.
[10]	陈巧莉，杨兵，洪晴悦，魏鲟钰，方楚楚，阚建全. 海洋生物毒素的分类、毒害作用机制及检测技术研究进展[J]. 食品科学, 2021, 42(5): 321-331.
[11]	冯翠萍，刘一诺，樊双喜，武竹英，钟其顶. 核磁共振磷谱法测定乳制品中的酪蛋白含量[J]. 食品科学, 2021, 42(4): 221-226.
[12]	赵非，陈宝英，李克峰，王旭. 高效液相色谱-荧光检测法测定红肉及其加工肉中唾液酸含量[J]. 食品科学, 2021, 42(4): 313-318.
[13]	黄佳茵，周雅琪，陈美玉，李苑，吴甜甜，胡亚芹. 基于甲基纤维素改性聚乙烯醇指示膜的制备、表征及对南美白对虾的鲜度指示[J]. 食品科学, 2021, 42(3): 194-203.
[14]	吴有雪，吴美娇，田亚晨，王政，郭亮，刘程，方水琴，刘箐. 沙门氏菌检测生物传感器研究进展[J]. 食品科学, 2021, 42(3): 339-345.
[15]	付瑞杰，周静，田风玉，焦必宁，何悦. 基于纳米材料的光学适配体传感器在农药残留检测中的应用研究进展[J]. 食品科学, 2021, 42(3): 330-338.

乳酸菌饮料中嗜酸乳杆菌的实时荧光定量PCR检测方法

Real-Time Fluorescent Quantitative PCR Method for Detection of Lactobacillus acidophilus in Probiotic Beverages

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