恩诺沙星快速酶联免疫吸附法检测试剂盒的研制

doi:10.7506/spkx1002-6300-201008004

食品科学 ›› 2010, Vol. 31 ›› Issue (8): 16-19.doi: 10.7506/spkx1002-6300-201008004

恩诺沙星快速酶联免疫吸附法检测试剂盒的研制

陈雪岚^1,2，金晶²，杨晓慧^2,*

1.江西师范大学生命科学学院 2.北京中德大地食品安全技术开发有限责任公司

收稿日期:2009-05-06 修回日期:2009-10-14 出版日期:2010-04-15 发布日期:2010-12-29
通讯作者: 陈雪岚 E-mail:xuelanchen14@yahoo.com.cn
基金资助:
国家“863”计划项目(2007AA10Z438)

Development of Enrofloxacin ELISA Test Kit

CHEN Xue-lan1,2，JIN Jing2，YANG Xiao-hui2,*

1. School of Bioscience, Jiangxi Normal University, Nanchang 330022, China；
2. Beijing Zhongde-Dade Food Safety Technology Co. Ltd., Beijing 100081, China

Received:2009-05-06 Revised:2009-10-14 Online:2010-04-15 Published:2010-12-29
Contact: CHEN Xue-lan E-mail:xuelanchen14@yahoo.com.cn

摘要/Abstract

摘要：

目的：研制恩诺沙星酶联免疫吸附法检测试剂盒。方法：采用EDC-NHS 法制备ENR-M-BSA 免疫原和ENR-OVA 检测抗原，用ENR-M-BSA 免疫BALB/C 小鼠，采用甲基纤维素半固体培养基法筛选单克隆抗体并采用间接竞争ELISA 对其进行分析。结果：通过公式计算ENR-M-BSA 摩尔偶联比为15:1，ENR-OVA 摩尔偶联比为7.2:1。筛选出1 株特异性分泌株3E9，其腹水纯化后间接竞争ELISA 测其效价为107，分型试剂盒测试显示此抗体属于IgG1 型；检测限为1ng/mL，线性范围在1～100ng/mL 之间，半量抑制浓度(IC50 值)为10ng/mL，与4 种结构类似物交叉反应均小于1%。结论：此株单克隆抗体可以用来建立恩诺沙星ELISA 检测试剂盒。

关键词: 恩诺沙星, 酶联免疫吸附法, 单克隆抗体

Abstract:

An enzyme-linked immunoabsorbence (ELISA) test kit was developed for enrofloxacin (ENR) detection. ENR-MBSA and ENR-OVA antigens were prepared by EDC-NHS method. BALB/C mice were immunized with ENR-M-BSA for monoclonal antibody generation. A specific monoclonal antibody was screened using methylcellulose-based semi-solid medium and analyzed using indirect competition ELISA. The molar coupling ratios of ENR-conjugated BSA and ENR-conjugated OVA were calculated to be 15:1 and 7.2:1, respectively. The specific monoclonal antibody 3E9 was obtained and the titer of purified 3E9 antibody reached 107 according to ELISA detection, and belonged to the family of IgG1 according to the detection using an antibody typing kit. The ELISA detection of ENR using the antibody exhibited a sensitivity of 1 ng/mL, a linear range of 1 to 100 ng/mL and a half inhibitory concentration (IC50) of 10 ng/mL. The cross-reactivity between the ELISA detection kit developed and four analogues was less than 1%. These results indicate that the monoclonal antibody has a promising potential in the development of ELISA test kits for ENR detection.

Key words: enrofloxacin (ENR), ELISA, monoclonal antibody

中图分类号:

TS207.5

陈雪岚1,2，金晶2，杨晓慧2,*. 恩诺沙星快速酶联免疫吸附法检测试剂盒的研制[J]. 食品科学, 2010, 31(8): 16-19.

CHEN Xue-lan1,2，JIN Jing2，YANG Xiao-hui2,*. Development of Enrofloxacin ELISA Test Kit[J]. FOOD SCIENCE, 2010, 31(8): 16-19.

[1]	王晓瑞，邱红玲，王寿利，朱海华，周莉，平洋，谭静，王永，王慧. 抗副溶血弧菌OMPK单克隆抗体的制备及其ELISA双抗体夹心检测方法建立[J]. 食品科学, 2021, 42(4): 319-325.
[2]	刘若冰，郝怡环，杨茜，焦文雅，王向红. 基于核酸适配体的AccuBlue荧光法检测动物食品中的恩诺沙星[J]. 食品科学, 2020, 41(24): 310-315.
[3]	谭庶，杨金易，许吉华，沈玉栋，曾道平，苏晓娜，钟翠丽，许小炫，孙远明. 鸡肉中金刚烷胺间接竞争ELISA检测方法的建立[J]. 食品科学, 2020, 41(10): 304-310.
[4]	王丽威，刘金，武俊瑞，乌日娜，岳喜庆. 抗牛免疫球蛋白G单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 食品科学, 2019, 40(2): 110-116.
[5]	刘蓓蓓，曹林. 基于量子点建立铅镉快速串联检测方法[J]. 食品科学, 2019, 40(18): 335-341.
[6]	杨熠，孟坤杰，赵红琼，米克热木·沙衣布扎提，张小莺,. 酶联免疫吸附法检测动物源性食品中恩诺沙星残留量[J]. 食品科学, 2017, 38(8): 239-243.
[7]	谢曼曼，李建武，王广彬，曾海娟，翟绪昭，丁承超，刘武康，刘箐. 副溶血性弧菌单克隆抗体的制备及特性鉴定[J]. 食品科学, 2017, 38(8): 63-68.
[8]	李杰，丁承超，翟续昭，王广彬，刘武康，谢曼曼，曾海娟，王淑娟，孙静娟，董庆利，刘箐. 弧菌外膜蛋白OmpK单克隆抗体的制备及其特性[J]. 食品科学, 2017, 38(6): 111-116.
[9]	彭宏威，白瑞樱，陈殿，孙远明，徐振林，曾道平，李段，伍志权，杨金易. 响应面试验优化动物源性食品中呋喃西林代谢物ELISA检测的衍生条件[J]. 食品科学, 2017, 38(6): 287-294.
[10]	张鑫磊，隋建新，陈静，王笑笑，林洪，曹立民. 水产品中恩诺沙星胶体金免疫层析毛细管检测及其前处理[J]. 食品科学, 2017, 38(22): 322-329.
[11]	翟绪昭，曾海娟，王广彬，董庆利，谢曼曼，丁承超，刘武康，王淑娟，李杰，刘箐. 阪崎克罗诺杆菌单克隆抗体的制备及其间接竞争-ELISA检测方法[J]. 食品科学, 2017, 38(20): 268-272.
[12]	陈荫楠，陈华，石贤爱，叶小军，樊海平. 抗呋喃唑酮单克隆抗体的制备及其应用[J]. 食品科学, 2016, 37(3): 151-157.
[13]	王亚楠，王晓斐，牛琳琳，雷壮，张海棠，王自良. 食品中镉离子胶体金免疫层析快速检测方法的建立及应用[J]. 食品科学, 2016, 37(18): 152-158.
[14]	伍伟健，董洁娴，饶美芳，詹屋强，王弘，孙远明. 抗孔雀石绿单链抗体-碱性磷酸酶融合表达和活性鉴定[J]. 食品科学, 2016, 37(17): 121-126.
[15]	张帅，齐颖颖，张红星，王怡雯，谢远红，刘慧. 双抗夹心酶联免疫吸附快速检测冷鲜肉中的6 种血清型沙门氏菌[J]. 食品科学, 2016, 37(16): 211-215.

恩诺沙星快速酶联免疫吸附法检测试剂盒的研制

Development of Enrofloxacin ELISA Test Kit

RichHTML

PDF (PC)

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价