纳米免疫磁分离-实时荧光聚合酶链式反应快速检测海产品中副溶血性弧菌

doi:10.7506/spkx1002-6630-201404022

食品科学

纳米免疫磁分离-实时荧光聚合酶链式反应快速检测海产品中副溶血性弧菌

张蕾1,2，曾静1,*，魏海燕1，马丹1，程晋霞2，张西萌1，张海予2

1.北京出入境检验检疫局，北京 100026；2.北京农学院，北京 102206

出版日期:2014-02-25 发布日期:2014-03-17
通讯作者: 曾静
基金资助:
国家质检总局公益性行业科研专项（201110034）；国家质检总局科技计划项目（2009IK184）

A Novel Method of Nano-Immunomagnetic Separation-Real Time-Polymerase Chain Reaction for Detecting Vibrio parahaemolyticus in Seafoods

ZHANG Lei1,2, ZENG Jing1,*, WEI Hai-yan1, MA Dan1, CHENG Jin-xia2, ZHANG Xi-meng1, ZHANG Hai-yu2

1. Beijing Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Beijing 100026, China;
2. Beijing University of Agriculture, Beijing 102206, China

Online:2014-02-25 Published:2014-03-17
Contact: ZENG Jing

摘要/Abstract

摘要：

采用副溶血性弧菌单克隆抗体、纳米免疫磁分离技术，结合实时荧光聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）检测方法，建立海产品中副溶血性弧菌纳米免疫磁分离-实时荧光PCR检测方法。副溶血性弧菌纳米免疫磁珠在菌体浓度为103 CFU/mL水平时，对副溶血性弧菌的捕获率达到74%。在纯培养、无需增菌情况下，该方法检测灵敏度达到140 CFU/mL；通过134 株副溶血性弧菌和74 株非目标菌的测试，实时荧光PCR技术具有良好的特异性；在食品基质添加实验中，其检测限为2 CFU/25 g样品，增菌时间缩短到8 h。

关键词: 副溶血性弧菌, 免疫磁分离, 实时荧光聚合酶链式反应

Abstract:

A novel method using monoclonal antibody of Vibrio parahemolyticus, nano-immunomagnetic separation (Nano-
IMS) plus real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) was established for detecting Vibrio parahemolyticus in seafoods.
The nano-immunomagnetic beads (Nano-IMB) created showed a capture rate for Vibrio parahemolyticus of 74% at a
bacterial concentration of 103 CFU/mL. The sensitivity of Nano-IMS-PCR was 140 CFU/mL under pure culture conditions
without enrichment. The RT-PCR method was highly specific for 134 Vibrio parahemolyticu and 74 non-target bacteria. The
detection limit of the method reached 2 CFU/25 g in artificial food samples. The enrichment time was shortened to 8 h.

Key words: Vibrio parahaemolyticus, nano-immunomagnetic separation, real time-polymerase chain reaction

中图分类号:

TS207.4

张蕾1,2，曾静1,*，魏海燕1，马丹1，程晋霞2，张西萌1，张海予2. 纳米免疫磁分离-实时荧光聚合酶链式反应快速检测海产品中副溶血性弧菌[J]. 食品科学, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201404022.

ZHANG Lei1,2, ZENG Jing1,*, WEI Hai-yan1, MA Dan1, CHENG Jin-xia2, ZHANG Xi-meng1, ZHANG Hai-yu2. A Novel Method of Nano-Immunomagnetic Separation-Real Time-Polymerase Chain Reaction for Detecting Vibrio parahaemolyticus in Seafoods[J]. FOOD SCIENCE, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201404022.

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