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当期目录

2013年 第34卷 第9期    刊出日期:2013-05-15
基础研究
富硒玉米蛋白水解物中硒肽及含硒氨基酸的结构鉴定
王真真,张久亮,王 驰,侯 焘,张 岩,何 慧*
2013, 34(9):  1-4.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309001
摘要 ( 1355 )   HTML ( 0)   PDF (2350KB) ( 549 )  
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为了明确硒在玉米蛋白中的赋存形式,采用高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS/MS),结合质谱数据库比对以及高效液相色谱-等离子体质谱法(HPLC-ICP/MS),对富硒玉米蛋白水解物中硒肽及含硒氨基酸的结构进行鉴定。结果确定了5个小肽,其氨基酸序列分别为:SeMet-MeSeCys-Glu、Met-MeSeCys-Glu、MeSeCys-Glu-Asp、Ile-MeSeCys-Glu、γ-Glu-MeSeCys;确定了4种含硒氨基酸,分别为硒代蛋氨酸(SeMet)、硒代乙硫氨酸(SeEt)、L-硒-甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)、硒代胱氨酸(SeCys2)。借助于标样对含硒氨基酸和二肽进行定量,5个硒肽均含MeSeCys,其中只有一个肽段含SeCys2;但在含硒氨基酸中则是以SeMet含量最高为(586.3±49.5)ng/g,最低的是SeCys2为(102.6±9.0)ng/g。

草鱼内脏蛋白质的水解特性
苘钰婷,丛艳君*
2013, 34(9):  5-9.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309002
摘要 ( 1443 )   HTML ( 0)   PDF (1949KB) ( 296 )  
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以草鱼内脏为原料,脱脂离心制备蛋白质粗提液,用SDS-PAGE方法测定蛋白质分子质量,然后以制备的草鱼内脏蛋白质为底物,比较研究木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶和中性蛋白酶的水解特性。结果表明:草鱼内脏蛋白质分子质量分别约为32.4、13.2、2.8kD。6种酶解液中氨基酸含量在前6h随着时间的延长迅速增加,后趋于平稳;风味蛋白酶的氨态氮含量最高,碱性蛋白酶与中性蛋白酶之间差异不显著,其他各种蛋白酶两两之间差异都显著。而胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶多肽含量在酶解6h达到最大值,碱性蛋白酶在酶解9h时达到最大值,木瓜蛋白酶多肽含量最高,而风味蛋白酶的最低。随着酶解的不断进行,酶解液的呈味效果不断发生着变化,酶解液的呈味特性随着氨基酸和多肽的释放,鲜味逐渐明显,以感官评价为指标风味蛋白酶的鲜味最强,6种蛋白酶互相之间差异都显著。
天然抗氧化剂对贮藏过程中大豆分离蛋白的氧化及功能特性影响
郭凤仙 黄小林 熊幼翎 陈洁
2013, 34(9):  10-13.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309003
摘要 ( 900 )   HTML ( 0)   PDF (1972KB) ( 430 )  
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以大豆分离蛋白为对象,研究添加天然抗氧化剂(β-胡萝卜素和生育酚)对其在贮藏12周前后的羰基、巯基含量以及溶解性、乳化性、凝胶性的影响。结果表明:贮藏12周后,对照大豆分离蛋白羰基含量大大升高,巯基含量下降,溶解度、乳化特性都显著降低,但凝胶强度却升高。添加β-胡萝卜素显著抑制了大豆分离蛋白在贮藏12周后的羰基含量的增加(P<0.05);同时β-胡萝卜素和生育酚的添加都能够有效抑制总巯基的降低(P<0.05)。在功能性方面,添加β-胡萝卜素以及生育酚一定程度能够抑制大豆分离蛋白溶解性和乳化性在贮藏后的下降;两种抗氧化剂都部分抑制了贮藏后大豆分离蛋白凝胶强度的提高。

适合蜂王浆蛋白质组的双向电泳技术
赵方圆1,2,吴亚君1,韩建勋1,陈 颖1,*,葛毅强2,3,*
2013, 34(9):  14-18.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309004
摘要 ( 1284 )   HTML ( 0)   PDF (2806KB) ( 354 )  
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为建立适用于蜂王浆蛋白质组研究的双向电泳技术,对其中的IPG胶条的选择、蛋白质上样量、等电聚焦时间及SDS-PAGE凝胶浓度等关键步骤进行探索和优化。结果显示:蜂王浆蛋白质pH值主要分布在pH 5~8范围内,当上样量为150μg,聚焦时间达到32000V·h的情况下能充分地聚焦,第二向使用10%的梯度胶时获得的双向电泳图谱最佳,在优化后的蜂王浆双向电泳图谱上可检测到62±4蛋白点,重复性高,分辨率较好。优化后的双向电泳技术体系适合于蜂王浆全蛋白质的双向电泳分析。
食物源血管紧张素转化酶抑制三肽的定量构效关系
陈季旺1,刘珊珊1,蔡广霞1,吴永宁1,2
2013, 34(9):  19-23.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309005
摘要 ( 2090 )   HTML ( 0)   PDF (1760KB) ( 266 )  
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收集近年来报道的血管紧张素转化酶(ACE)抑制三肽及其IC50值,建立三肽的氨基酸序列与ACE抑制活性的定量关系(QSAR)模型。以氨基酸侧链的疏水性、立体性质、电性参数为自变量,ACE抑制三肽的lg(IC50)为因变量, QSAR模型方程为:Y=1.952+0.1229X2+0.0924X3+0.0425X5+0.1777X7+0.136X8-0.0809X9-0.1763X10。模型显示较低疏水值、体积参数的氨基酸如Val、Leu和Ile倾向于处于N端第一位,较低疏水值、电荷参数的氨基酸如Lys和Arg倾向于第二位,较低疏水值和较高体积参数、电荷参数的氨基酸如Pro、Phe等倾向于第三位。利用该模型对新发现的三肽VNP、VWP、VAP的IC50值进行预测,3种三肽的实测值和预测值误差在0.06~0.23之间,均在模型样本误差范围内,证明该模型具备良好的预测能力。
蓝鲨软骨Ⅱ型胶原蛋白的物理化学特性
宋瑞瑞1,2,包 斌3,卜永士1,王永先1,陈丽娟1,吴文惠2,3,*
2013, 34(9):  24-27.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309006
摘要 ( 1815 )   HTML ( 0)   PDF (1778KB) ( 591 )  
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目的:对采用碱处理-胃酶水解方法分离的蓝鲨软骨Ⅱ型胶原蛋白的物理化学特性进行研究。方法:蓝鲨软骨经冷冻干燥粉碎,顺次用碱处理、胃蛋白酶限制性水解、盐析和透析获得Ⅱ型胶原蛋白。采用SDS-PAGE、氨基酸成分分析、紫外光谱扫描和差示扫描量热法对提取的Ⅱ型胶原蛋白进行鉴定。结果:蓝鲨Ⅱ型胶原蛋白由分子质量为130kD的α1链构成,甘氨酸是蓝鲨Ⅱ型胶原蛋白含量最高的氨基酸为356‰,富含丙氨酸、脯氨酸和羟脯氨酸,且肽链氨基酸残基具有Gly-X-Y的构成特点,蓝鲨Ⅱ型胶原蛋白在226nm波长处有紫外吸收峰,变性温度为41℃。结论:采用碱处理-限制性酶水解分离得到蓝鲨Ⅱ型胶原蛋白,具有Ⅱ型胶原蛋白的典型特征。

宁夏枸杞籽分离蛋白的功能特性
吴华玉,刘敦华*
2013, 34(9):  28-32.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309007
摘要 ( 1521 )   HTML ( 0)   PDF (2347KB) ( 283 )  
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采用传统的碱提酸沉法从宁夏枸杞籽粕中提取枸杞籽分离蛋白,对其氨基酸含量和功能特性进行测定分析。结果表明:此提取工艺流程可行,宁夏枸杞籽分离蛋白的氨基酸组成较平衡,谷氨酸含量偏高;吸油性和乳化性功能良好,溶解性和持水性一般,起泡性与起泡稳定性相对较差。SDS-PAGE电泳图谱表明,宁夏枸杞籽蛋白含有6种不同分子质量的蛋白亚基,其分子质量分别为48、35、32、20.4、19、18.5kD。
不同加热方法对牛肉酶解蛋白与葡萄糖反应活性的影响
吴 肖1,孔令会1,于立梅2
2013, 34(9):  33-36.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309008
摘要 ( 1130 )   HTML ( 0)   PDF (1945KB) ( 334 )  
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目的:探讨不同加热方法(微波、高压、热空气流、水蒸气)下牛肉酶解蛋白与葡萄糖之间的反应活性。方法:以精制新鲜牛肉为基料,采用分子质量分布分析法和感官品评分析法。结果:在不同加热方法处理中,牛肉酶解蛋白类物质活性发生变化的方式不同,主要是降解作用、分解作用和聚合作用,而Maillard反应作用方式不太显著,体现牛肉风味物质分布于1000~4999D区间,主要集中于3000~4999D之间,结论:在3000~4999D这个区间的牛肉风味物质烤香不明显,主要体现良好的牛肉本味和浓厚的口感。

转谷氨酰胺酶对鳙鱼糜热诱导胶凝特性的影响
贾 丹1,2,刘 茹1,2,刘明菲1,黎玉彬1,熊善柏1,2,*
2013, 34(9):  37-41.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309009
摘要 ( 1334 )   HTML ( 0)   PDF (2510KB) ( 216 )  
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以鳙鱼糜为对象,测定添加不同转谷氨酰胺酶(TGase)量的鱼糜在热加工过程中凝胶动态流变特性、胶凝温度、凝胶形成活化能、分子质量分布、凝胶强度和溶解性的变化,以研究TGase对鳙鱼糜热诱导胶凝特性的影响。结果表明:鳙鱼糜在热诱导凝胶形成过程中,其胶凝温度(Tgel)和胶凝活化能(Ea)随着TGase添加量的增大而降低,而溶解度和肌球蛋白重链(MHC)条带百分比随着TGase添加量的增大而降低后趋于稳定。添加TGase可降低鱼糜发生胶凝所需的能垒,使MHC之间更易形成ε-(γ-谷氨酰)赖氨酸共价键。而鱼糜凝胶的破断强度、凝胶强度、持水性和储能模量(G′)则随TGase添加量的增加呈现先上升后下降的趋势,当TGase添加量为28.08U/100g鱼糜时,其凝胶强度最高、失水率最小。与对照组相比,添加TGase 28.08U/100g鱼糜的鳙鱼糜凝胶强度提高2.7倍,失水率减少46%,G′提高2.5倍。当TGase添加量超过28.08U/100g鱼糜,鳙鱼糜凝胶的G′、破断强度、凝胶强度和持水性下降。适当添加TGase可降低Ea和Tgel,明显提高鳙鱼糜的凝胶强度和持水性。
不同品种花生蛋白主要组分及其亚基相对含量分析
杜 寅,王 强*,刘红芝,王 丽,刘 丽
2013, 34(9):  42-46.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309010
摘要 ( 1399 )   HTML ( 0)   PDF (1919KB) ( 368 )  
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对我国主要花生种植区的170个花生品种的蛋白质组成进行SDS-PAGE电泳分析。结果表明:不同花生品种的蛋白组分和亚基相对含量在种质材料间存在差异。各品种均含有花生球蛋白和伴花生球蛋白,花生球蛋白与伴花生球蛋白比值变化范围介于0.80~1.68之间,变异系数为15.23%,大于10%,说明不同花生品种蛋白组成比例存在较大的变异性。各品种亚基变异显著,其中,花生球蛋白的35.5kD亚基差异最显著,变异系数达55.07%,双纪2号等35个品种缺失35.5kD亚基条带,占所测试品种的20.59%。相关性分析表明,花生球蛋白与伴花生球蛋白之间呈极显著负相关(r=-0.998)。
酿酒红葡萄多酚氧化酶活力及总酚含量
王月晖,徐洪宇,张京芳*,侯力璇,成 冰
2013, 34(9):  47-51.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309011
摘要 ( 2559 )   HTML ( 0)   PDF (1850KB) ( 376 )  
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分析27酿酒红葡萄品种的多酚氧化酶(PPO)活力、总酚(TP)含量及褐变度(BD),并研究该3个指标对干红葡萄酒L*的影响。利用PPO活力与TP含量的比值η(PPO活力/TP含量)进行系统聚类,同时采用二者的平均值进行象限分布以筛选品种。结果表明:不同酿酒红葡萄品种PPO活力、TP含量及BD之间存在显著性差异,PPO活力与TP含量之间无显著相关性,但二者均与BD呈显著正相关。PPO活力、TP含量及BD与干红葡萄酒L*值呈显著负相关。蛇龙珠、黑赛比尔、赤霞珠、梅鹿辄、卡马特、品丽珠为PPO活力低且TP含量高的优良酿酒红葡萄品种。
核桃蛋白源血管紧张素转化酶抑制剂的分离纯化
顾 欣1,2,李 迪3,侯雅坤1,2,崔 洁1,2,王建中1,2,*
2013, 34(9):  52-55.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309012
摘要 ( 1987 )   HTML ( 0)   PDF (1907KB) ( 488 )  
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从核桃蛋白源的胃蛋白酶水解物中分离纯化出具有高体外血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性的抑制剂。利用超滤、凝胶色谱、高效液相色谱等方法进行分离纯化,以体外ACE抑制活性为检测指标,并用N端氨基酸测序鉴定其结构为酪氨酸-谷氨酸-脯氨酸(Tyr-Glu-Pro,YEP),对筛选出的抑制剂进行体外模拟消化稳定性研究。结果表明,胃蛋白酶酶解液通过纯化所得ACE抑制剂的IC50值为0.32μg/mL,该ACE抑制剂在经过体外模拟消化后仍保持良好的ACE抑制活性。
乳清分离蛋白美拉德反应产物的体外抗氧化特性
王文琼,包怡红*,陈 颖
2013, 34(9):  56-60.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309013
摘要 ( 3318 )   HTML ( 0)   PDF (2109KB) ( 343 )  
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以乳清分离蛋白和木糖、葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖为美拉德反应原料,研究蛋白与糖的种类及混合比例对褐变程度的影响,并对反应产物进行抗氧化活性检测。结果表明:木糖与乳清分离蛋白按质量比2:1混合,湿热糖基化反应后,褐变程度最强,且在乳清分离蛋白与木糖按质量比2:1条件下反应后,乳清分离蛋白-木糖体系的美拉德反应产物(MRPs)具有较高还原能力和抗脂质过氧化能力及对DPPH自由基和O2-·具有较高的清除能力。
乳清蛋白水解程度与抗菌能力的相关性
柯德森1,王红星2,巫锦雄1,王正询1,刘春媚1,2
2013, 34(9):  61-65.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309014
摘要 ( 2145 )   HTML ( 0)   PDF (2681KB) ( 368 )  
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利用不同方式水解乳清蛋白,测量水解程度及水解物的抗菌能力并探讨二者的相关性。结果表明:一定程度的水解可使乳清蛋白产生明显的抗菌能力,抗菌能力的强弱与水解程度密切相关(胰蛋白酶水解程度小于12mg氨基酸/mL时呈正相关,r=0.9740;水解程度大于12mg/mL时呈负相关,r=-0.9468)。胰蛋白酶在不同水解条件下水解乳清蛋白时均存在一个最适水解程度(10~12mg/mL),在此范围内的水解物呈现最大的抑菌能力。而盐酸水解法无论在乳清蛋白水解液的抗菌能力或在抗菌能力的稳定性方面均明显差于酶水解法。本研究证明了适当水解(酶法水解时控制水解程度为10~12mg/mL)能够显著提高乳清蛋白的抗菌能力,可为利用乳清蛋白开发新型食品天然保鲜剂提供依据。
发酵芝麻粕中芝麻小肽的分离纯化及其体外抗氧化活性
彭惠惠1,李吕木1,2,3,*,钱 坤3,许发芝2,吴 东3,周 芬3,丁小玲2
2013, 34(9):  66-69.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309015
摘要 ( 4782 )   HTML ( 0)   PDF (1775KB) ( 798 )  
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研究芝麻粕固态发酵过程中产生的小肽的抗氧化活性。从发酵芝麻粕中提取活性小肽,通过SephadexG-15分离纯化,得到3个分子质量不同的小肽,经测定分别是三肽、四肽、六肽。分别测定其清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基的活性、用水杨酸法测定其清除羟自由基(·OH)的活性、用铁离子还原法测定其的总还原力。1mg/mL小肽粗提液、三肽和四肽的DPPH自由基清除率为90%,六肽为80%;0.6mg/mL 三肽和四肽的•OH清除率均达到100%,而小肽粗提液和六肽为90%;4mg/mL的小肽粗提液、四肽、六肽和2mg/mL三肽的总还原力相当于0.5mg/mL谷胱甘肽。结果表明:固态发酵芝麻粕中的小肽具有较强的还原力,对DPPH自由基和•OH均具有较强的清除作用,且抗氧化性随着小肽分子质量的降低而增强。
蚂蚁抗菌肽的分离纯化及其活性
苏 翔,崔敬爱,陈晓平*
2013, 34(9):  70-73.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309016
摘要 ( 1857 )   HTML ( 0)   PDF (2081KB) ( 658 )  
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从蚂蚁中分离纯化出抗菌肽并对其部分生物活性进行研究。以长白山野生红蚂蚁为原料,采用乙醇浸提法进行粗提,再利用加热-层析法分离纯化,得到具有抑菌活性的小分子多肽,进行相对分子质量和抑菌活性的测定。结果表明:经乙醇浸提和加热层析得到的蚂蚁抗菌肽纯度较高,SDS-PAGE电泳表现为单一条带,其分子质量为3.746kD;蚂蚁抗菌肽对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、肠炎沙门氏菌、枯草芽孢杆菌均有抑菌作用,最小抑菌质量浓度分别为0.325、0.65、0.1625、0.325mg/mL;蚂蚁抗菌肽表现出较高的热稳定性。
雅安藏茶抑制α-淀粉酶的活性级分筛选与评价
聂坤伦1,2,何 利3,速晓娟1,2,边金霖1,2,郭金龙1,杜 晓1,2,*
2013, 34(9):  74-79.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309017
摘要 ( 1166 )   HTML ( 0)   PDF (2348KB) ( 313 )  
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以雅安藏茶为材料,用体积分数70%乙醇溶液提取后经系统萃取分离得到7种雅安藏茶级分,并测定各个级分的主要成分及对α-淀粉酶活性的影响,筛选其活性成分。结果表明:雅安藏茶抑制α-淀粉酶的活性成分是儿茶素、茶褐素和咖啡碱,以对α-淀粉酶活性的最大抑制率为标准,各个活性成分抑制能力依次为儿茶素>茶褐素>咖啡碱。

磁性纳米粒子快速分离纯化超氧化物歧化酶
杨 林1,孙术国2,罗 章1,*
2013, 34(9):  80-84.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309018
摘要 ( 1061 )   HTML ( 0)   PDF (2379KB) ( 241 )  
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磁性纳米粒子快速分离纯化牦牛血液中超氧化物歧化酶(SOD),并建立吸附动力学模型,研究结合液(磷酸盐缓冲溶液)和解离液(醋酸钠缓冲溶液) pH值、NaCl浓度和吸附时间对SOD比活力和回收率的影响,以此确定最佳分离纯化条件。结果表明:随着结合液pH值增大,SOD比活力先升高后急剧降低,SOD回收率一直呈增大趋势,最佳pH值为7.5;随着结合液NaCl浓度增加,SOD比活力和回收率先升高,后降低,最佳NaCl浓度为0.5mol/L;随着解析液pH值增大,SOD比活力逐渐升高,而SOD回收率呈减小降趋势,最佳pH值为5.0;磁性纳米粒子对SOD最佳吸附时间为2h;随初始酶粗品浓度的增加,磁性纳米粒子对SOD吸附作用拟合Langmuir吸附模型,且获得的SOD比活力始终维持在较高水平(3000~3250U/mg),说明磁性纳米粒子对SOD分离效果良好。

芦蒿秸秆总黄酮富集纯化及产物初步鉴定
邓荣华,郭宇星,李晓明,吕丽爽*
2013, 34(9):  85-89.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309019
摘要 ( 1281 )   HTML ( 0)   PDF (2162KB) ( 225 )  
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应用AB-8大孔树脂对芦蒿秸秆总黄酮进行富集和纯化,优化得到树脂富集纯化芦蒿秸秆总黄酮的最佳工艺条件;通过显色反应、紫外特征光谱吸收对纯化后的产物进行初步鉴定。结果表明:AB-8大孔树脂具有较好的吸附和解吸性能,最佳吸附洗脱条件为:pH4.0,上样质量浓度1.476mg/mL,上样流速1mL/min,上样体积为树脂体积的2.5倍,洗脱剂为体积分数60%的乙醇,洗脱流速1mL/min,洗脱体积为1.5~2.0BV左右。在该条件下,纯化产品中总黄酮的纯度由5.80%增加到30.26%;显色反应及紫外特征吸收峰显示,芦蒿秸秆总黄酮中可能含有黄酮醇、异黄酮、黄烷酮和双氢黄酮类,并且结构中有邻位双OH存在。
生物工程
内含肽介导谷氨酰胺转胺酶酶原的活化
杜 坤,周 丽,堵国成,陈 坚,周哲敏
2013, 34(9):  90-94.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309020
摘要 ( 1196 )   HTML ( 0)   PDF (2136KB) ( 349 )  
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链霉菌来源的谷氨酰胺转胺酶(microbial transglutaminase,MTG)以酶原(pro-MTG)的形式表达,需要蛋白酶将其活化。蛋白酶有降解MTG及其底物的可能,且增加MTG的分离纯化成本。为解决上述问题,将一种pH值依赖型的内含肽(intein)插入pro区和MTG之间,用以介导二者之间的断裂,实现MTG的pH值控制活化。结果表明:重组蛋白(pro-Intein-MTG)在大肠杆菌中实现了可溶高表达。在pH7.0、25℃的体外环境下,重组蛋白经24h即可完全转化为MTG,且最高酶活力为0.23U/mL(菌体浓度稀释至OD600nm为1.0时测得)。重组型MTG的酶比活力和Km值分别为14.3U/mg、69.4mmol/L,与野生型MTG相近;且圆二色谱显示二者具有相似的二级结构,说明内含肽的插入对于MTG的功能和结构无显著影响。
高浓度发酵乳基料的制备及复合酶对其特性的影响
鲍志宁,林伟锋*,叶 君,熊 犍*
2013, 34(9):  95-98.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309021
摘要 ( 838 )   HTML ( 0)   PDF (2041KB) ( 220 )  
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通过测定蛋白质含量为7.8%的高浓度复原牛乳在发酵过程中酸度、活菌数和氨基酸态氮的变化,研究新型高浓度发酵乳基料的发酵特性。在高浓度复原乳基料发酵的基础上,添加复合酶酶解与干酪乳杆菌发酵同步进行,获得一种酸度和氨基酸态氮含量更高的高浓度发酵乳基料。复合酶的添加对高浓度发酵乳基料的滴定酸度和氨基酸态氮含量具有很大影响。结果表明:干酪乳杆菌发酵高浓度复原牛乳72h后,滴定酸度为268.5 °T,氨基酸态氮含量为0.117g/100g。发酵与酶解同步72h后,滴定酸度为414.4°T,氨基酸态氮含量为0.132g/100g。复合酶添加量越高,滴定酸度和氨基酸态氮含量越高,但复合酶添加量对高浓度发酵乳基料的pH值和活菌数变化无影响。

酵母原生质体制备、融合及高产β-胡萝卜素融合子的筛选
王岁楼,王海翔,杨志萍,吕春晖,步 芬
2013, 34(9):  99-103.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309022
摘要 ( 1059 )   HTML ( 1)   PDF (2407KB) ( 484 )  
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为提高黏红酵母NR-98(生长温度28℃较高,但β-胡萝卜素产量较低)β-胡萝卜素发酵的产率,将其与法夫酵母Ph-1(β-胡萝卜素产量较高,但生长温度只有20℃)进行了原生质体融合。通过研究两种酵母菌原生质体制备、再生及融合的影响因素,最终筛选出了既能在28℃较高温度下生长、β-胡萝卜素产量又高于两出发菌株的具有遗传稳定性的融合子R-5,其β-胡萝卜素产量不仅比黏红酵母NR-98提高了53.33%,而且比法夫酵母Ph-1也提高了27.42%,达到9.20mg/L。
茶叶儿茶素抑制剂对胰脂肪酶构效关系的影响
王诗卉,刘 云*
2013, 34(9):  104-107.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309023
摘要 ( 1146 )   HTML ( 0)   PDF (1992KB) ( 404 )  
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运用圆二色光谱(CD)和荧光光谱法(FS),探讨茶叶儿茶素(EGCG)对胰脂肪酶(PPL)二级和三级结构的变化规律;同时,以橄榄油为底物,研究反应时间和EGCG浓度对胰脂肪酶活性的影响。结果表明:EGCG对PPL的抑制作用1h后达到最大值,抑制率为30%。EGCG低浓度(≤1mmol/L)时,EGCG对PPL的抑制率随EGCG浓度升高而增大,当EGCG超过此浓度时,抑制率随EGCG浓度的升高基本保持不变。Lineweaver-Burk作图可知,EGCG对PPL的抑制类型为非竞争性抑制作用。CD和FS分析表明,EGCG对PPL二级和三级结构均有一定的影响,PPL二级结构的变化与EGCG浓度呈正相关,而三级结构的变化与EGCG浓度没有显著的相关性。FS图谱还表明,EGCG对PPL色氨酸存在荧光淬灭现象,且静态淬灭和动态淬灭同时存在。

交联海藻糖合酶聚集体的制备及其性质
陈颖 肖辰鹏 陈晓云 杨丽维 唐柳 李明春 张峻
2013, 34(9):  108-113.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309024
摘要 ( 1292 )   HTML ( 0)   PDF (2886KB) ( 234 )  
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采用交联酶聚集体技术制备了海藻糖合酶交联酶聚集体(CLEAs),研究了不同沉淀剂、酶与交联剂比例、交联强度及硼氢化钠还原处理对海藻糖合酶CLEAs活性的影响及其结构特征与反应性能。结果表明:采用10mg/mL的酶浓度以30%的PEG为沉淀剂,以终浓度0.5%的戊二醛室温交联2h,再以硼氢化钠还原处理后,制备得到的海藻糖合酶CLEAs最适催化温度为70℃,比游离酶提高20℃,最适pH为7.0,与游离酶相比,CLEAs的温度及pH稳定性均得到提高,对Zn2+、Cu2+、Fe2+、Al3+金属离子的抗性明显增强。微观形貌分析表明单个海藻糖合酶CLEA粒径在0.2-0.5μm,众多CLEA以“脚手架”结构形成大小不一的集簇。

集胞藻PCC6803中S2P蛋白酶假定底物的体外诱导表达及纯化
秦春燕,陈 谷*
2013, 34(9):  114-120.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309025
摘要 ( 1185 )   HTML ( 0)   PDF (4106KB) ( 233 )  
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金属蛋白酶S2P同源蛋白在行光合作用的蓝藻中广泛存在。S2P蛋白酶通过在膜切割转录调控因子(anti-σ因子),释放σ因子来参与胁迫响应是跨膜信号转导的保守机制。集胞藻PCC6803中S2P蛋白酶参与胁迫响应的跨膜信号转导,但其作用机理及底物均未明确。经过深入考察分析,实验锁定了4对σ因子和anti-σ因子的组合:SigEChlH(Slr1055)、SigI(Sll0687)-Sll0688、SigG(Slr1545)-Slr1546及SigH(Slr0856)-Sll0857。以pET-30b(+)为载体,通过重组表达纯化,成功获得一系列S2P假定底物的重组蛋白:全长anti-σ因子及截去羧基端部分序列的截短片段,包括Slr1055、Slr1055△(1~232)、Sll0688、Sll0688△(1~152)、Slr1546、Slr1546△(1~174)、Sll0857、Sll0857△(1~101)和大肠杆菌的S2P底物RseA(1~148)。为下一步在体外重构S2P蛋白酶与底物的酶切体系、阐释蓝藻体内S2P介导的级联信号转导机制奠定了基础。

苍白芽孢杆菌D-阿拉伯糖异构酶克隆表达及D-塔格糖制备
张 娥,张 梁,石贵阳
2013, 34(9):  121-126.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309026
摘要 ( 1147 )   HTML ( 0)   PDF (2420KB) ( 238 )  
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目的:利用筛选出的一株能产D-阿拉伯糖异构酶(D-AI)的耐热菌株,将D-半乳糖转化为D-塔格糖。方法:从实验室保藏的菌株中筛选出一个产D-阿拉伯糖异构酶能力较强的苍白芽孢杆菌,将该菌株中的D-阿拉伯糖异构酶基因D-AI克隆到载体pET-28a上,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中表达。通过SDS-PAGE分析发现,重组菌株能表达出大量可溶性蛋白。结果:D-阿拉伯糖异构酶纯化酶的最适反应pH值和温度分别是7.0和60℃,在pH6.0~8.0范围和30~70℃范围内具有较好的稳定性。加入Mn2+、Zn2+、Fe2+、Ca2+和Ba2+均能够使D-塔格糖的转化率提高,而Mg2+和Cu2+则对酶活力产生不同程度的抑制。结果表明:底物质量浓度为18g/L的D-半乳糖(含5mmol/L Mn2+),加入到pH值为7.0的重组细胞粗酶液中,在60℃条件下反应12h,可达到最高转化率为41.6%。结论:这表明具有生物活性的重组D-AI在大肠杆菌E.coli(BL21)中成功表达且具备工业化生产D-塔格糖的潜能。
肝素黄杆菌硫酸软骨素酶AC的高效重组表达体系构建及其酶学性质研究
吴敬君1,李 晔1,2,张 翀1,李 梅1,邢新会1,*
2013, 34(9):  127-134.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309027
摘要 ( 1331 )   HTML ( 0)   PDF (2434KB) ( 348 )  
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为实现硫酸软骨素酶AC(chondroitinase AC,ChonAC)在大肠杆菌中高效表达,通过PCR方法从肝素黄杆菌(Pedobacter heparinus)中扩增得到ChonAC基因cslA,采用融合蛋白技术构建麦芽糖结合蛋白(maltose-bindingprotein,MBP)与ChonAC的融合表达载体(MBP-ChonAC),并在低温(15℃)条件下实现MBP-ChonAC的可溶活性表达,通过MBPTrap HP可实现一步纯化,使纯度可达95%以上,酶比活力可达94.1IU/mg融合蛋白(即相当于143.8IU/mgChonAC蛋白当量)。对MBP-ChonAC的酶学研究发现,其最佳催化pH值为7.5~8.0,最佳Ca2+浓度为20mmol/L,最适NaCl浓度为50mmol/L,最佳作用温度为20~35℃。MBP-ChonAC具有较好的热稳定性,在30℃时其半衰期可达8.3h。同时对其以硫酸软骨素A为底物的动力学常数测定发现,MBP-ChonAC相比ChonAC其Km稍有增大而催化常数kcat稍有降低,但是差别不大,表明MBP的融合没有对ChonAC的催化能力造成影响。通过宿主优化、诱导浓度优化及培养基优化进一步提高了MBP-ChonAC的表达量,其摇瓶培养酶活力就可达10800.5IU/L。

食源性明胶多肽的制备、分离及其抗冻活性
汪少芸,赵立娜,周焱富,饶平凡
2013, 34(9):  135-139.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309028
摘要 ( 1471 )   HTML ( 0)   PDF (4735KB) ( 320 )  
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用碱性蛋白酶水解食源性明胶以制备抗冻多肽,通过控制酶解条件获得具有抗冻活性的明胶多肽酶解液,并对其进行色谱分离、质谱鉴定及氨基酸全序列测定。结果表明:当酶与底物比1:15、酶解时间30min、酶解温度45℃时,所获得的明胶多肽酶解液的抗冻活性最高;酶解制备的明胶多肽液经过冷-热循环(cold-heat-stage)后抑制冰晶生长和抗冻活性表现出特定的规律,说明酶解条件的控制优化是实现明胶多肽液抗冻活性的关键。通过Sephadex G-50、SP Sephadex C-25、C18-RPLC色谱分离和MALDI-TOF质谱鉴定,确定分子质量为2107D的特异性多肽表现出显著的抗冻活性。通过Edman降解法测得其氨基酸全序列为GERGFPGERGSPGAQGLQGPR。

谷氨酰胺酶基因原核表达载体的构建与表达
卢 彪,吴拥军*,吴玉俊,罗 熹,刘艳敏
2013, 34(9):  140-142.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309029
摘要 ( 2749 )   HTML ( 0)   PDF (2112KB) ( 578 )  
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为验证谷氨酰胺酶基因glsA2的酶活力,以pET-32a为表达载体构建原核表达重组质粒pET32a-glsA2,转化表达菌株E.coli BL21(DE3)。从异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)的诱导浓度及诱导表达时间两方面对重组菌株glsA2基因的表达系统进行优化。结果显示,0.1mmol/L IPTG诱导6h,谷氨酰胺酶活力达到608.2U/μg,约为对照的15倍。
大肠杆菌重组表达磷脂酶C的发酵工艺优化
赵金星,张 梁*,顾正华,丁重阳,石贵阳
2013, 34(9):  143-149.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309030
摘要 ( 3471 )   HTML ( 0)   PDF (2776KB) ( 795 )  
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以重组表达铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa 41磷脂酶C的大肠杆菌BL21 (DE3)/pET28a-plcH为考察菌株,从TB培养基出发,在优化缓冲液、碳源种类和质量浓度的基础上,比较异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)、乳糖诱导重组酶表达的效果,并考察甘氨酸对重组酶发酵的影响;最后,在7L发酵罐规模对上述优化工艺进行放大验证。结果表明:重组大肠杆菌最适培养基组成为:蛋白胨12g/L、酵母膏24g/L、甘油5g/L,0.25mol/L Tris-HCl(pH7.2~7.4)缓冲液配制;在此培养基中添加卡那霉素(Kana)的质量浓度至0.15mg/mL,37℃、200r/min培养6h后,添加乳糖至终质量浓度为5g/L,在25℃、150r/min诱导培养20 h,重组磷脂酶C活力可达到(1422.42±37.17)U/mL;7L发酵罐实验中,总酶活力达到(11583.35±70.21)U/mL,比摇瓶条件下提高了7倍左右,其中胞内酶活力最高为(10957.97±58.03)U/mL,胞外酶活力最高为(645.27±13.87)U/mL。

鸡肉酶解工艺对热反应鸡肉香精香气的影响
陈海涛,徐晓兰,张 宁,孙宝国,王 鹤
2013, 34(9):  150-154.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309031
摘要 ( 2976 )   HTML ( 0)   PDF (2042KB) ( 328 )  
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以鸡肉酶解液为原料,通过热反应制备鸡肉香精。以水解度和热反应香精的感官评价为综合指标,通过单因素试验和正交试验考察不同的酶解工艺对鸡肉香精香气的影响。结果表明:鸡肉不经加热预处理更有利于水解;优化的酶解条件为采用动物蛋白酶和复合蛋白酶进行质量比1:1复配、总加酶量1.100‰、底物质量比(肉和水的质量比)1:1、酶解温度50℃,采用分步加酶法(先用复合蛋白酶酶解1h后,不灭酶,再用动物蛋白酶酶解2h),水解度可达20.47%。用该酶解液制备的鸡肉香精香气浓郁、仿真度高。
醋酸纤维素/聚丙烯复合膜固定化转谷氨酰胺酶的研究
时 敏,王 雪,马丽娜,于殿宇*
2013, 34(9):  155-158.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309032
摘要 ( 1845 )   HTML ( 0)   PDF (2602KB) ( 233 )  
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通过醋酸纤维素-聚丙烯复合膜对转谷氨酰胺酶进行固定,以酶活力为指标,进行单因素试验,考察酶液质量浓度、吸附时间、戊二醛添加量、戊二醛交联时间对转谷氨酰胺酶活力的影响,确定最佳固定化条件为:酶液质量浓度15mg/mL、吸附时间3h、戊二醛添加量0.3g/100mL、戊二醛交联时间4h。在最佳固定化条件下固定的酶活力可达16.1U/g膜。对固定化酶和游离酶的酶学性质进行比较,得出游离酶最适温度为35~40℃,而固定化酶膜最适温度为45~50℃;游离酶最适pH值为6~7,固定化酶膜最适pH值为5~6,固定化酶比游离酶向酸性偏移。

重组毕赤酵母葡萄糖氧化酶的纯化和性质
郝杰清,王帅坤,师 慧,王振伟,孟延发*
2013, 34(9):  159-163.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309033
摘要 ( 1595 )   HTML ( 0)   PDF (2354KB) ( 424 )  
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目的:探讨重组毕赤酵母葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)的分离纯化过程及其性质。方法:摇瓶发酵得到的粗酶液经Q-Sepharose Fast Flow层析纯化,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)确定其分子质量,用紫外和荧光分光光度计研究其光谱特征。结果:获得GOD的纯品,酶的纯化倍数为1.35倍,酶活回收率为92.7%,天然分子质量为150kD,亚基分子质量为75kD;酶活力在pH5.0~8.0和55℃以下稳定,最适pH值为6.0,最适温度为40℃;以葡萄糖为底物的酶学动力学常数Km值为21.06mmol/L;Hg2+、Ag+、Cu2+、Fe2+对其有强烈的抑制作用;该酶在275nm波长处有最大紫外光吸收,在344nm波长处有最大荧光吸收峰;液体状态下该酶在4℃条件下放置6个月活性没有损失,常温下可保存3~5d。结论:重组毕赤酵母葡萄糖氧化酶纯化成本低,收率高,有利于大规模纯化,得到的纯品稳定性好,具有较高的利用价值。

重组葡萄糖异构酶的固定化研究
邓 辉1,2,陈 晟1,2,陈 坚1,2,吴 敬1,2,*
2013, 34(9):  164-169.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309034
摘要 ( 1887 )   HTML ( 0)   PDF (2304KB) ( 248 )  
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采用壳聚糖絮凝和戊二醛交联的方法,对表达生产Thermobifida fusca葡萄糖异构酶(GIase)的重组大肠杆菌细胞进行固定化工艺研究,以期获得高性能和低成本的固定化产酶细胞方法。考察影响细胞絮凝和交联的各种因素,并对固定化酶制剂的理化性质、动力学常数进行测定。结果表明:最佳的固定化条件为在高密度发酵液中添加0.6%硅藻土和5mmol/L Mg2+,经60℃热处理30min后,在壳聚糖终质量分数0.1‰、pH5.5、充分搅拌条件下絮凝,酶活回收率达98%;絮凝产物在戊二醛体积分数0.25%、pH6.5、轻微搅拌条件下交联3h,以未交联的样品作参照(100%),交联样品的酶活保留率达80%。相对于游离GIase,此条件下制备的固定化GIase的最适温度仍为80℃、最适pH值从10降低至9;在工业生产应用条件下,固定化GIase的初始酶活力达到356U/g,半衰期为61d,能够满足高果糖浆工业的生产要求。

花生ACE抑制肽结构表征与构效关系
王 强1,王春艳1,2,胡 晖1,刘红芝1,刘 丽1
2013, 34(9):  170-174.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309035
摘要 ( 1420 )   HTML ( 0)   PDF (2252KB) ( 441 )  
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在碱性蛋白酶Alcalase与N120P蛋白酶复合酶解花生分离蛋白制备花生短肽的基础上,采用凝胶过滤色谱与制备型反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离纯化得到27个组分,从中筛选出ACE抑制活性最高的组分P8,其在0.010mg/mL质量浓度条件下ACE抑制率达85.77%,IC50值为0.0052mg/mL(6.42μmol/L)。采用基质辅助激光解吸附电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-TOF MS)对P8的氨基酸序列进行分析,得出P8的相对分子质量为808.80,氨基酸序列为Lys-Leu-Tyr-Met-Arg-Pro(KLYMRP)。通过固相合成的方法合成短肽KLYMRP,并证实其具有显著的ACE抑制活性,ACE抑制IC50值为0.0038mg/mL(4.69μmol/L)。构效关系分析结果表明:短肽Lys-Leu-Tyr-Met-Arg-Pro的C末端为Pro,N末端为碱性氨基酸Lys,且肽的疏水性很强,有利于与ACE活性部位的结合;短肽KLYMRP与ACE活性位点的残基形成5个氢键,一个Pi-Cation相互作用,并与锌离子形成配位键,这些作用力共同稳定了短肽-ACE复合物的构象,从而有利于ACE抑制活性的发挥。

草酸青霉果胶酶分离纯化工艺及酶学性质研究
张名爱1,2,王宝维1,2,*,岳 斌2,荆丽珍2,3,葛文华2
2013, 34(9):  175-179.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309036
摘要 ( 1377 )   HTML ( 0)   PDF (2477KB) ( 227 )  
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为了探索从鹅肠道分离的草酸青霉(Penicillium oxalicum)发酵生产果胶酶分离纯化新工艺,通过硫酸铵分级盐析、Sephacryl S-200分子筛柱层析、DEAE-Sephadex A-50离子交换层析技术对其发酵产物进行分离纯化,得到果胶酶的主要组分半乳糖醛酸酶(PG)和果胶酯酶(PE),并分别对PG和PE的最适作用pH值、温度以及分子质量等酶学特性进行研究。结果表明:PG和PE纯化倍数分别为32.21和23.98,均达到电泳纯,分子质量分别为61.4kD和42.2kD。PG最适作用pH值为5.0,最适反应温度为40℃,pH值稳定范围为4.0~6.0,在30、40℃随着处理时间延长酶活力保持稳定。PE最适作用pH值为6.0,最适温度为50℃,pH值稳定范围为5.0~7.0;PE在30℃时的热稳定性较好,40℃时处理60min,酶活力变化不明显。
鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白FliC的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备
陈 明1,2,徐幸莲2,周光宏2,汤晓艳1,*,袁 飞3,陈爱亮1
2013, 34(9):  180-184.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309037
摘要 ( 2623 )   HTML ( 0)   PDF (2503KB) ( 567 )  
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利用PCR扩增出鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白基因fliC,连接到原核表达载体pET28a(+)上,测序鉴定后转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS感受态细胞中,构建了原核表达系统。经1mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导及Ni-NTA纯化后,得到了带6×His纯化标签的分子质量大小约为54.6kD的表达产物,和预测蛋白大小一致,且大部分表达产物以可溶形式存在? 利用Western-blotting进一步鉴定,结果表明,该蛋白能与抗 His 标签的单抗发生特异性反应。用纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,获得多克隆抗体,并对抗血清的效价和特异性进行检测,结果表明,多抗的效价较高,特异性较好。
鸡骨渣中蛋白质的酶解应用效果研究
李苗云1,赵改名1,*,许 雄1,王玉芬2,谢 华2,柳艳霞1,田 玮1
2013, 34(9):  185-188.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309038
摘要 ( 1822 )   HTML ( 0)   PDF (1708KB) ( 266 )  
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以鸡骨渣为原料,研究木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶和复合蛋白酶对酶解后的残渣量、酶解浓缩液的氨基酸组成和以酶解浓缩液为基料制备出的鸡肉香精效果,确定适用于开发鸡骨渣产品的蛋白酶类。结果表明:4种蛋白酶在最佳酶解条件下中试酶解后产品的残渣量分别为26.37%、32.47%、43.25%和30.36%,与小试基本一致,以木瓜蛋白酶酶解液中最低。4种酶解液中氨基酸总量(TAA)和必需氨基酸(EAA)含量差异显著(P<0.05),其中以木瓜蛋白酶酶解液中含量最高,分别为6.505mg/g和14.965mg/g;以不同蛋白酶酶解液制备的鸡肉香精的风味差异显著(P<0.05),以木瓜蛋白酶酶解液制备的香精,整体肉香突出,有良好的鸡脂风味。因此,木瓜蛋白酶适合深度开发鸡骨渣。
榛子仁蛋白酶解工艺的优化及酶解物抗氧化能力的研究
郭庆启1,2,张 娜2,姜元松1,邹传山1
2013, 34(9):  189-193.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309039
摘要 ( 1480 )   HTML ( 0)   PDF (2123KB) ( 283 )  
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以东北毛榛子为原料,通过响应面法对Alcalase碱性蛋白酶水解榛子仁蛋白的条件进行优化并建立回归模型,得到最佳水解条件为:酶与底物比3720U/g、酶解温度50.6℃、酶解pH 8.4,此工艺条件下的水解度预测值为14.41%,水解度实测值为(14.38±0.06)%。抗氧化能力测定结果表明:榛子仁蛋白酶解物的总还原能力约为VC的70%,清除DPPH自由基的半数抑制质量浓度(IC50)值为0.7311mg/mL,是VC值的138倍。
茶树EGCG-O-甲基转移酶的纯化及酶学性质
吕海鹏,张 悦,费冬梅,林 智*
2013, 34(9):  194-197.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309040
摘要 ( 1881 )   HTML ( 0)   PDF (2110KB) ( 438 )  
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对重组茶树EGCG-O-甲基转移酶进行分离纯化,并对其酶学性质进行研究。结果表明:经HisTMTrap层析纯化后,获得了纯度超过95%的重组融合蛋白,纯化倍数为22.51倍,酶活回收率为34.54%,酶比活力达到0.0186U/mg;酶分子质量约为27.6kD;该酶的最适反应温度为35℃、最适pH7.5;以表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)作为底物,酶学动力学常数Km为0.100mmol/L,Vmax为7.485mg/(L•min)。
牦牛奶酪中乳酸菌的分离鉴定及发酵性能分析
杨吉霞1,2,陈芝兰3,杨海燕4,黄艾祥5,陈宗道1,2,贺稚非1,2,*
2013, 34(9):  198-204.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309041
摘要 ( 1790 )   HTML ( 0)   PDF (2455KB) ( 411 )  
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为了探讨牦牛奶酪中乳酸菌菌种的多样性和发酵性能,从西藏、云南、新疆采集了17个样品,用MRS培养基菌落计数平均值为(4.08±0.60)(lg(CFU/g)),pH值平均值为4.52±0.29,采用表型和基因型相结合的方法鉴定出39株乳酸菌,其中乳杆菌35株为L. buchneri 2株、L. casei 16株、L. diolivorans 3株、L. fermentum 3株、L.helveticus 3株、L. kefiri 3株和L. plantarum 5株,片球菌4株为P. acidilactici 1株、P. pentosaceus 3株。通过对39株菌产酸活性、利用柠檬酸盐、产蛋白酶和胞外多糖活性等发酵性能分析,筛选出产酸活性强的菌株X24、X38、X29、X25、X21、X22、X30、X35,而菌株T7同时能利用柠檬酸盐、产蛋白酶和胞外多糖,都具有优良的发酵性能。说明牦牛奶酪中乳酸菌菌种具有多样性,有发酵性能优良的菌株。
火鸡肌肉丙氨酰氨肽酶的酶学特性
田 甜,魏延玲,何立超,阮贵萍,张迎阳,章建浩*
2013, 34(9):  205-209.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309042
摘要 ( 1302 )   HTML ( 0)   PDF (1968KB) ( 206 )  
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通过45%~65%的硫酸铵沉淀法,从火鸡肌肉中分离得到初步纯化的丙氨酰氨肽酶(AAP,EC 3.4.11.14),研究其酶学特性及盐分和AAP水解产物对其酶活力的影响。结果表明:AAP的最适反应温度为37~39℃,最适pH值约为6.8~7.5。0.8mol/L的NaCl仅抑制10%的AAP相对酶活力,说明盐分对AAP的酶活力抑制作用较弱;AAP主要水解产物丙氨酸(Ala)对AAP几乎没有抑制作用,而其他产物氨基酸均对AAP有较显著的反馈抑制作用(P<0.05),对AAP的抑制作用强弱顺序为苯丙氨酸>赖氨酸>亮氨酸>甲硫氨酸。
脂肪酶在尼龙网上的固定化及其酶学性质研究
赵 磊,唐 婧,王成涛*
2013, 34(9):  210-215.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309043
摘要 ( 1593 )   HTML ( 0)   PDF (2202KB) ( 335 )  
参考文献 | 相关文章 | 计量指标
以尼龙网为载体,戊二醛为交联剂制备固定化脂肪酶(Candida sp. 99-125),并对固定化条件及固定化酶的酶学性质进行研究。结果表明,最适固定化条件为:戊二醛体积分数3%、交联时间60min、脂肪酶质量浓度10mg/mL、固定化时间6h。与游离酶相比,固定化脂肪酶的最适温度从45℃提高至50℃,最适pH值相同,均为7.0,并在pH5.0~7.0范围内均有非常高的活力。固定化脂肪酶相对于游离酶具有更好的热稳定性和pH值稳定性,并具有良好的操作稳定性,其重复操作5次后相对酶活力仍保持在80%左右。固定化脂肪酶的Km值(0.57mol/L)和最大反应速率Vmax(0.29×10-3mol/(L·s))显著高于游离酶,对底物的亲和力较游离酶弱。
黑曲霉ZJUQH产α-半乳糖苷酶的固体发酵培养基优化研究
徐腾洋,方若思,董亚晨,陈启和*
2013, 34(9):  216-219.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309044
摘要 ( 1422 )   HTML ( 0)   PDF (1868KB) ( 226 )  
参考文献 | 相关文章 | 计量指标

通过响应面方法优化固体发酵培养基,以提高黑曲霉ZJUQH产α-半乳糖苷酶的能力。在前期研究的基础上,通过部分因子试验对蛋白胨、Na2HPO4·12H2O、料液比和接种量进行系统考察,筛选出两个影响较显著的因素料液比和蛋白胨添加量,然后通过中心组合试验进一步优化,建立以α-半乳糖苷酶酶活力为响应值的二次回归方程模型,获得了最优的固体发酵培养基组成:蛋白胨0.6g、Na2HPO4·12H2O 0.08g、料液比1:2.44(m/V)接种量1.5mL/5g。在该优化的培养条件下,固态发酵6d产α-半乳糖苷酶的酶活达到(77.21±2.01)U/g , 比优化前(蛋白胨0.4g、Na2HPO4·12H2O 0.08g、料液比1:3、接种量1.5mL/5g)培养得到的酶活力最高值(49.05±2.11)U/g提高57.41%。

黑曲霉H1-9b发酵产葡萄糖氧化酶的工艺优化
唐 菁,赵 芯,苏 茉,唐云明*
2013, 34(9):  220-223.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309045
摘要 ( 1285 )   HTML ( 0)   PDF (1812KB) ( 198 )  
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以黑曲霉H1-9b(Aspergillus niger H1-9b)作为葡萄糖氧化酶生产菌株,通过单因素和正交试验设计,优化提高酶活力的发酵条件。结果表明:最佳反应条件为:接种量200μL孢子悬液、装液量80mL、初始pH5.3、转速200r/min、表面活性剂吐温-80添加量3%。在此条件下,葡萄糖氧化酶活力提高到68.96U/mL,为不添加吐温-80发酵产酶量28.60U/mL的2.4倍。

Ⅵ型类人胶原蛋白基因COL6A2的克隆及在毕赤酵母中的分泌表达
徐立群,王 皓,孙 旸,王 刚,陈 欢,陈 光*
2013, 34(9):  224-227.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309046
摘要 ( 1241 )   HTML ( 0)   PDF (2962KB) ( 312 )  
参考文献 | 相关文章 | 计量指标

用PCR方法以Ⅵ型胶原蛋白基因组DNA为模板,获得Ⅵ型胶原蛋白α2链基因,并将该基因插入到表达载体pPIC9K,对重组质粒pPIC9K-COL6A2所含的目的片段进行双向测序。将测序正确的重组质粒用限制性内切酶SalⅠ线性化,经电击转化到毕赤酵母GS115感受态细胞中。通过MM/MD法进行甲醇利用表型的筛选,PCR鉴定目的基因的整合及G418梯度筛选高拷贝转化菌。在酵母α-Factor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下,目的蛋白分泌表达到胞外。1%甲醇诱导72h的发酵液,经SDS-PAGE电泳鉴定该重组蛋白分子质量约为32kD。

右旋糖苷对生姜蛋白酶的化学修饰及其酶学性质影响
张建萍,刘恩岐*,巫永华,陈尚龙
2013, 34(9):  228-233.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309047
摘要 ( 3115 )   HTML ( 0)   PDF (2387KB) ( 248 )  
参考文献 | 相关文章 | 计量指标

以NaIO4活化的右旋糖苷为修饰剂,研究修饰反应条件对生姜蛋白酶化学修饰效果的影响与修饰前后酶学性质及构型构象的变化。结果表明:较佳修饰条件为温度42℃、pH 6.0、酶与活化右旋糖苷质量比1:22、修饰时间3h。与修饰前天然生姜蛋白酶相比,修饰酶的相对酶活力提高了2.0倍,酶蛋白氨基修饰率为57.8%。以酪蛋白为底物时,修饰酶的最适温度、最适pH值和酶反应动力学参数Km值较天然生姜蛋白酶均有所降低,热稳定性明显增强;修饰酶的紫外光谱吸收峰向长波长方向偏移,构型构象发生了变化。

带鱼蛋白酶解条件优化及酶解物抗氧化性能
厉 望1,2,靳 挺2,*,武玉学2
2013, 34(9):  234-239.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309048
摘要 ( 1060 )   HTML ( 0)   PDF (2384KB) ( 194 )  
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为获得高抗氧化活性的带鱼蛋白酶解物,以带鱼为原料,以DPPH自由基清除率为主要指标,水解度为辅助指标,采用4种蛋白酶酶解带鱼,筛选出最佳用酶,并运用响应面分析方法优化带鱼蛋白酶解条件;分析酶解物的还原力和对·OH的清除能力,并测定分子质量,分析氨基酸组成。结果表明:碱性蛋白酶(Alcalase)为带鱼蛋白酶解的最适用酶,酶解物清除DPPH自由基的最优条件为:温度48℃、酶解时间3.80h、固液比1:3、加酶量1.65%,在此条件下,DPPH自由基清除率达到60.13%;酶解物有较好的还原力,对·OH有很好的清除作用;其分子质量为1311D;酶解物含亮氨酸等具有清除自由基作用较好的氨基酸,其含量占总氨基酸含量的35.10%;构成肽的氨基酸含量占总氨基酸含量的89.8%,低分子肽为带鱼蛋白酶解物的主要成分。

醋蛋水解物的类蛋白反应及其对ACE抑制活性的影响
杨 锋1,2,陈锦屏1,莫锦薇2
2013, 34(9):  240-244.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309049
摘要 ( 1451 )   HTML ( 0)   PDF (1929KB) ( 295 )  
参考文献 | 相关文章 | 计量指标
为研究类蛋白反应对醋蛋水解物ACE抑制活性的影响,先利用胃蛋白酶水解醋蛋液,再添加胃蛋白酶和氨基酸对其进行类蛋白反应,并采用单因素试验优化反应条件。结果表明:优化类蛋白反应条件为:氨基酸选用脯氨酸、脯氨酸添加量为1mol/mol水解物游离氨基、底物质量分数50%、反应pH 5.0、反应温度37℃、反应时间12h,在此条件下,类蛋白产率为25.82%。在优化条件下,通过控制不同的反应时间制备不同的类蛋白反应产物,并测定每个产物的ACE抑制活性。反应6h以后的产物其ACE抑制活性较反应前的活性明显增强,其中反应12h的产物活性最高,其IC50值从反应前的0.48mg/mL降低到0.17mg/mL。经过12h的与脯氨酸的类蛋白反应,能显著提高醋蛋水解物的ACE抑制活性。
过量表达乳酸脱氢酶的重组干酪乳杆菌构建及发酵性能
朱龙宝,葛 飞,李婉珍,陶玉贵*
2013, 34(9):  245-249.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309050
摘要 ( 1327 )   HTML ( 0)   PDF (1995KB) ( 407 )  
参考文献 | 相关文章 | 计量指标
乳酸脱氢酶(LDH)是干酪乳酸菌(L.casei)合成L-乳酸途径中的关键酶,通过构建过量表达乳酸脱氢酶的重组干酪乳杆菌,提高干酪乳杆菌发酵产乳酸的能力。根据干酪乳杆菌乳酸脱氢酶的基因序列设计引物,PCR扩增获得乳酸脱氢酶基因(ldh),将其连接到乳酸杆菌穿梭质粒pMG36e,构建重组质粒pMG-ldh,电转入L.casei,利用红霉素MRS平板筛选阳性克隆,获得表达乳酸脱氢酶的重组菌L.casei pMG-ldh,SDS-PAGE和酶活分析结果表明成功表达了一个约37kD的乳酸脱氢酶蛋白,重组酶活力最高达95U/mL,较原始菌23U/mL提高了近3.1倍。为进一步提高其产乳酸能力,添加4mmol/L激活剂FBP和8mg/L烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)前体物烟酸,结果表明:重组菌L.caseipMG-ldh乳酸积累128.2g/L,生产强度达到3.04g/(L•h),较原始菌株L.casei分别提高了35%和53%,发酵周期缩短6h。
蒜苗过氧化氢酶的分离纯化及部分性质研究
胡瑞斌,孙 芳,任美凤,唐云明*
2013, 34(9):  250-255.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309051
摘要 ( 1473 )   HTML ( 0)   PDF (2419KB) ( 289 )  
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新鲜蒜苗经匀浆、缓冲液浸提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析,获得电泳纯的过氧化氢酶。该酶比活力达到25975.36U/mg,酶活回收率为40.05%,纯化倍数为125.97。该酶的全分子质量为234.93kD,亚基分子质量为59.16kD;最适温度为45℃,最适pH值为7.2,该酶在25~45℃及pH5.0~10.0的范围内有较好的稳定性;在最适条件下测得其Km值为38.2mmol/L;甲醇、乙醇、异丙醇及SDS、KSCN、Ag+、Cu2+、Mn2+、Co2+、Cd2+、Zn2+、Ca2+、Mg2+、Ba2+对该酶有抑制作用,Li+、Pb2+及低浓度K+对该酶具有一定的激活作用。
施氏假单胞菌F4产黄曲霉毒素B1降解酶条件的优化
杨文华,刘晓华,李文明,李海星,曹郁生*
2013, 34(9):  256-261.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309052
摘要 ( 2169 )   HTML ( 0)   PDF (2399KB) ( 396 )  
参考文献 | 相关文章 | 计量指标
在前期工作中分离到可高效降解黄曲霉毒素B1(AFB1)的施氏假单胞菌F4,本实验对其产AFB1降解酶的发酵条件进行考察和优化,选择与产酶相关的种龄、接种量、起始pH值、发酵时间以及发酵温度5个因素,以AFB1降解酶酶活力为评价指标,在单因素试验的基础上,通过三因素三水平的Box-Behnken响应面分析法优化施氏假单胞菌发酵产AFB1降解酶的条件。结果表明,在接种量和起始pH值分别为3%和6.5时,最优发酵条件为种龄10.47h、发酵时间42.52h、发酵温度30.28℃,在此发酵条件下,酶活力可达到2768.7U,比优化前提高了28.99%。
枯草芽孢杆菌角蛋白酶kerC基因在毕赤酵母中的高效表达
韩学易,唐自钟,王丽华,陈 惠*
2013, 34(9):  262-266.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309053
摘要 ( 4085 )   HTML ( 0)   PDF (2352KB) ( 501 )  
参考文献 | 相关文章 | 计量指标
以角蛋白酶基因为研究对象,构建毕赤酵母(Pichia pastoris)稳定的高效表达系统。采用PCR方法从枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B-3中克隆得到角蛋白酶基因kerC,将其构建在毕赤酵母表达载体pPICZαA上,得到重组质粒pPICZαA-kerC,转入毕赤酵母X-33中,成功实现了角蛋白酶基因kerC在真核表达系统中的高效表达。重组菌株以体积分数1%的甲醇诱导培养108h后,酶活力可达32.31U/mL,提高了11.15倍。重组酶最适温度为60℃,最适pH值为7.5,反应体系中3mmol/L的Co2+、Fe2+和Ca2+能明显增强其酶活力。SDS-PAGE检测表明,重组酶分子质量约为31kD。
豆粕酶解过程中蛋白质分子亚基组成及其抗原性变化
王章存,李乐静,袁道强,崔胜文,赵学伟,王吉中,胡金强
2013, 34(9):  267-270.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309054
摘要 ( 2481 )   HTML ( 0)   PDF (2561KB) ( 289 )  
参考文献 | 相关文章 | 计量指标
采用碱性蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶分别水解脱脂豆粕,用SDS-PAGE分别测定水溶性酶解物和水不溶性酶解残余物中的大豆蛋白分子亚基组成,用双抗体夹心酶联免疫反应(ELISA)分别测定其抗原活性。结果表明:碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解10min时,大豆7S的α’、α、β亚基和11S的酸性多肽链已基本消失,具有抗原活性的蛋白含量分别由195.90mg/g豆粕降解为90.50mg/g豆粕(碱性蛋白酶)或94.30mg/g豆粕(木瓜蛋白酶)。酶解120min时,两种酶的抗原活性去除率分别为75.70%和61.40%,而胰蛋白酶对大豆蛋白亚基和抗原性的降解效果相对较弱。
酶法制备黑豆抗氧化肽及其分离纯化与氨基酸组成分析
李 华1,刘恩岐1,2,唐仕荣2,巫永华2
2013, 34(9):  271-276.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309055
摘要 ( 1660 )   HTML ( 0)   PDF (2237KB) ( 311 )  
参考文献 | 相关文章 | 计量指标

以氧自由基清除能力(ORAC)为评价指标,在单酶与多酶组合水解工艺制备黑豆肽比较实验的基础上,采用超滤与大孔树脂吸附、乙醇分级洗脱分离纯化抗氧化黑豆肽;通过氨基酸组成测定,分析抗氧化活性与多肽氨基酸侧链基团性质的关联性。结果表明:采用Alcalase、Flavourzyme和Neutrase组合水解,相对分子质量<3000的超滤组分具有较强的抗氧化活性;DA201-C树脂对抗氧化肽的分离效果优于其他3种实验树脂,体积分数为75%乙醇洗脱组分的平均疏水性值和碱性氨基酸含量较高,具有相对最强的ORAC值;以Trolox当量与谷胱甘肽(GSH)当量测定的ORAC值呈极显著的正相关关系(P<0.01)。

高灵敏度测定壳聚糖酶活力的新方法及其比较
张永勤,张 杰,常海燕,张 坤,刘征东,罗彩华,牟晓凤
2013, 34(9):  277-281.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309056
摘要 ( 2103 )   HTML ( 0)   PDF (2146KB) ( 376 )  
参考文献 | 相关文章 | 计量指标

目的:建立一种测定壳聚糖酶活力的新方法——3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙盐酸盐水合物(MBTH)法。方法:以动力学法通过测定水解过程中壳聚糖释放还原端基的速率来计算酶活力,并以测定纤维素酶中壳聚糖酶的微量活力为例,对测定过程中的几个关键参数进行讨论。结果:在37℃、pH6.0酶解条件下,底物壳聚糖溶液的测定质量终浓度需达到2mg/mL以上;酶解反应时间控制在60min内为宜,可以用终点法定量测得壳聚糖酶活力。结论:通过比较MBTH法、DNS法和铁氰化钾法发现MBTH法更准确、更灵敏、检测范围宽、操作简便。其检测限为13mU/mL,而铁氰化钾法是该法的1.6倍,DNS法是该法的116倍。应用本法所测其酶解壳聚糖的Km值为0.12mg/mL,而用DNS法则较难准确测得。

营养卫生
酪蛋白糖巨肽和乳铁蛋白灌胃对小鼠肠道微生物定殖抗力的影响
任效东,陈庆森,李俊洁,周丽丽,阎亚丽
2013, 34(9):  282-286.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309057
摘要 ( 1384 )   HTML ( 0)   PDF (1827KB) ( 178 )  
参考文献 | 相关文章 | 计量指标
研究探讨酪蛋白糖巨肽(casein glycomacropeptide,CGMP)和乳铁蛋白(lactoferrin,Lf)对小鼠肠道双歧杆菌属数量与肠杆菌属数量对数值比值(B/E值)的影响。选取48只BALB/c小鼠随机分成8组:对照组(日食组),安慰组(灌胃生理盐水0.2mL),低、中、高剂量CGMP组(灌胃等体积不同质量浓度的CGMP溶液),低、中、高剂量Lf组(灌胃等体积不同质量浓度的Lf溶液),灌胃周期为14d。分别在灌胃前以及实验的第3、7、11、15天和停止灌胃后6d(第21天)用逼迫法采集小鼠新鲜粪便,采用选择性培养基进行肠道中双歧杆菌与肠杆菌数量的测定。结果表明:中剂量的CGMP(0.5mg/mL)和Lf(0.1mg/mL)均可促进双歧杆菌增殖且抑制肠杆菌增殖,B/E值增加,且CGMP促进小鼠肠道B/E值的增长最为显著。研究证实CGMP和乳铁蛋白在一定程度上可以使肠道B/E值增加,并且对小鼠肠道菌群具有一定的调节作用。
血管紧张素转化酶2(ACE2)在糖尿病大鼠肾损伤中的作用及机制分析
王珊珊,马 畅,张 伟,王艳霞,张源淑*
2013, 34(9):  287-291.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309058
摘要 ( 1090 )   HTML ( 0)   PDF (1777KB) ( 323 )  
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目的:通过比较肾脏组织中血管紧张素转化酶Ⅰ(angiotensin converting enzyme Ⅰ,ACE)-血管紧张素Ⅱ(ang iotensin Ⅱ,AngⅡ)-血管紧张素Ⅱ受体1亚型(Ang Ⅱ type 1 receptor,AT1)/血管紧张素转化酶2(angiotensinconverting enzymeⅡ,ACE2) -血管紧张素1-7(angiotensin 1-7,Ang 1-7)-Mas及肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensinsystem,RAS)相关调节因子在肾损伤过程中的表达差异,探讨ACE2在糖尿病大鼠肾脏损伤发生发展中的作用及可能的分子机制。方法:研究选用STZ腹腔注射致大鼠糖尿病,分别于15d(对照1组和模型1组)和30d(对照2组和模型2组)断头处死,取肾脏组织。PCR检测肾脏组织中ACE、AT1、ACE2和Mas mRNA的表达水平;放免法测定肾脏局部组织中肾素活性和Ang I、AngⅡ含量。结果显示:与对照组相比,模型1组大鼠肾脏组织中ACE2 和其Mas受体mRNA表达升高,ACE mRNA表达无显著差异,AT1 mRNA表达下降,ACE/ACE2 mRNA比值下降;模型2组大鼠肾脏组织中ACE2 mRNA表达低于对照2组,Mas受体mRNA表达无显著变化,ACE mRNA的表达高于对照2组,AT1受体有同样升高趋势,ACE/ACE2 mRNA表达比值较对照2组升高,有显著性差异。放射免疫分析结果显示:模型1组肾脏局部组织中肾素活性和Ang I含量低于对照1组,有显著性差异(P<0.05),而AngⅡ含量高于对照1组,无显著性差异(P>0.05);模型2组肾素活性和Ang I极显著高于对照2组(P<0.01),同时AngⅡ也显著高于对照2组(P<0.05)。结论:ACE与ACE2表达失调是糖尿病大鼠肾损伤发生发展的原因之一。损伤初期以ACE2-Ang(1-7)-Mas轴的激活占优势;严重损伤时,ACE-Ang Ⅱ-AT1轴的激活占优势。ACE2在早期肾脏病变的发病中通过降解AngⅡ发挥积极的保护作用。

1,3-二氯-2-丙醇对睾丸间质细胞R2C活性及孕酮合成的影响
白 顺1,孙建霞2,白卫滨3,*,邹飞雁1,张齐好4,黄亚东4
2013, 34(9):  292-295.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309059
摘要 ( 1384 )   HTML ( 0)   PDF (2331KB) ( 303 )  
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目的:研究1,3-二氯-2-丙醇(1,3-DCP)对体外睾丸间质细胞活性及孕酮合成的影响。方法:分别用0.5、1、2、4、6mmol/L浓度的1,3-DCP作用R2C细胞48h,利用MTT法获得1,3-DCP对R2C细胞的IC25、IC50以及IC75。选取以上3种不同浓度的1,3-DCP作用细胞4h或24h,通过单细胞电泳法(SCGE)检测其作用4h时对DNA损伤的程度;通过放射免疫法(RIA)检测4h或24h处理时对孕酮合成的影响。结果:与对照组相比,1,3-DCP能抑制R2C细胞的增殖,其IC25、IC50、IC75分别为(1.161±0.046)、(1.897±0.018)、(3.100±0.040)mmol/L;作用4h对R2C细胞DNA有损伤作用;各浓度组作用4h或24h后与对照组相比均能降低孕酮的合成。结论:1,3-DCP能抑制R2C的活性,影响细胞孕酮的合成。

小米米糠中抗癌细胞增殖活性蛋白的分离纯化
单树花1,2,武海丽1,李宗伟1,袁琳洁1,赵文彬1,刘庆午1,郭茂林1,李卓玉1,*
2013, 34(9):  296-300.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309060
摘要 ( 1602 )   HTML ( 0)   PDF (2661KB) ( 316 )  
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采用丙酮沉淀、硫酸铵沉淀、Q阴离子交换柱、SP阳离子交换柱、蛋白热变性法对小米米糠蛋白进行逐步分离纯化,并结合细胞增殖抑制实验(MTT法),筛选纯化出小米米糠中抗肿瘤活性蛋白(FMB)。体外抗肿瘤活性实验表明:不同质量浓度(0.025、0.05、0.075、0.1μg/μL)的FMB均可抑制人结肠癌细胞株DLD1和人宫颈癌细胞株HeLa的增殖,并且具有明显的剂量依赖性;而对正常人肝细胞HL-7702无明显抑制作用。倒置显微镜下观察细胞形态特征发现:经FMB处理48h后,DLD1和HeLa细胞出现细胞核明显皱缩、部分细胞漂浮死亡等凋亡特征;而对正常肝细胞株HL-7702无明显影响。

热处理对牛乳铁蛋白促成骨细胞增殖活性影响
刘猛 杜明 孔莹莹 徐伟丽 宋微 张兰威
2013, 34(9):  301-304.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309061
摘要 ( 1216 )   HTML ( 0)   PDF (2207KB) ( 194 )  
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从新生 SD大鼠乳鼠中提取成骨细胞后,采用 MTT 法进行细胞增殖实验,比较不同加热处理条件对乳铁蛋白(Lf)促成骨细胞增殖活性的影响。结果表明:未加热乳铁蛋白能显著促进成骨细胞增殖,且在50~500μg/mL范围内呈剂量依赖关系;在24、48、72h不同时间节点上LF对成骨细胞的作用有所差异。与未加热乳铁蛋白相比,65℃/30min和72℃/10s加热处理对乳铁蛋白的活性影响较小;85℃/10min和95℃/10min处理后乳铁蛋白的促成骨活性下降,而且与低质量浓度的实验组相比,热处理对高质量浓度的乳铁蛋白实验组影响较大。

马鹿角蛋白酶解物的抗氧化、抗疲劳和免疫活性
侯 潇,高 建,李春雨,王 铮,金莉莉,王秋雨*
2013, 34(9):  305-309.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309062
摘要 ( 2114 )   HTML ( 0)   PDF (2328KB) ( 259 )  
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目的:以复合蛋白酶与风味蛋白酶双酶解的马鹿角蛋白酶解物和马鹿角蛋白作为受试样品,研究样品的抗氧化、抗疲劳和免疫调节功能。方法:采用邻苯三酚自氧化法、水杨酸比色法和总还原力测定法,研究酶解物体外抗氧化的功能;通过测定酶解物灌胃小鼠的血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,分析其体内抗氧化功能;通过小鼠负重游泳、血乳酸、肝糖原测定研究酶解物的抗疲劳功能;通过ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验及小鼠碳廓清实验研究酶解物对小鼠免疫功能的影响。结果:马鹿角蛋白酶解物对羟自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O2-·)均有清除能力,且高于同等质量浓度的马鹿角蛋白,总还原力与马鹿角蛋白相比也有提高;可提高小鼠血清SOD活性,降低其血清MDA含量,并明显延长小鼠负重游泳时间、降低血乳酸值和增加肝糖原含量;可显著增强小鼠的免疫功能。结论:马鹿角蛋白酶解物具有抗氧化、抗疲劳和提高免疫功能的作用,活性明显优于马鹿角蛋白。
专题论述
花生过敏原结构及加工研究进展
韩远龙1,2,吴志华1,*,李 璞1,李西莹3,陈红兵1
2013, 34(9):  310-315.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309063
摘要 ( 1747 )   HTML ( 0)   PDF (1417KB) ( 503 )  
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花生过敏已成为世界各地普遍存在的公众性健康问题,得到广泛关注,对花生过敏原的研究日渐深入。过敏原结构为加工降低其过敏原性提供基础,用各种加工手段降低甚至消除花生过敏原蛋白的致敏性,尤其是Ara h 1、Ara h 2和Ara h 6、Ara h 3/4这些含量高、致敏性强的主要过敏原的致敏性已备受重视。本文主要介绍花生过敏原研究在结构及加工方面的进展,以期为低致敏甚至脱敏花生的生产提供一定的参考,以保证实现丰富食物过敏患者食品选择的同时,有效降低食品安全风险。
植物UDP-糖基转移酶生化特性和功能研究进展
姬向楠,何 非,段长青,王 军*
2013, 34(9):  316-323.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309064
摘要 ( 3589 )   HTML ( 0)   PDF (1821KB) ( 1298 )  
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UDP-糖基转移酶催化糖基转移反应,将糖基从活化的供体分子转移到受体分子上,从而调节受体分子在细胞和机体内的活性,如生物活性、溶解性和转运性。糖苷化是植物次生代谢较为普遍的修饰反应,在调节植物体内激素平衡、解除外源毒素毒性以及次生代谢产物的合成和贮存等方面发挥重要功能。本文就与植物次生代谢产物、植物激素及生物异源物质糖苷化相关的UDP-糖基转移酶的生化特性和功能研究进展进行综述,以期为本领域相关研究提供一定的参考。
小麦面粉强筋改良酶制剂研究进展
张 充,陆兆新*
2013, 34(9):  324-329.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309065
摘要 ( 1439 )   HTML ( 0)   PDF (2534KB) ( 568 )  
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面粉改良剂可以提升面粉品质,溴酸钾作为面粉强筋改良剂在面制品加工过程中已被禁止使用,寻找安全的替代品成为食品添加剂研究领域的热点之一。酶本质是蛋白质,经过食品加工后对人体安全无害,是标准的可替代溴酸钾的绿色食品添加剂。本文对目前国内外有关面粉强筋改良酶制剂的研究进展,包括面粉改良酶制剂的种类、强筋的作用机制以及在应用中存在的问题进行综述。
利用Caco-2细胞模型评价乳源ACE抑制肽小肠吸收机制的研究进展
祝 倩1,郭宇星1,*,潘道东1,2
2013, 34(9):  330-335.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309066
摘要 ( 1453 )   HTML ( 1)   PDF (1595KB) ( 501 )  
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乳中特定的活性肽可以有效地抑制血管紧张素转化酶(ACE)的活性,起到抗高血压的作用。但是乳源ACE抑制肽由于结构不同,经口服后并不都能通过小肠黏膜进入血液循环,因此并不都具有降血压的功效,口服生物利用度也较低。本文介绍乳源ACE抑制肽的研究现状和活性评价方法,概述利用Caco-2细胞模型研究乳源ACE抑制肽在小肠中的摄入、小肠细胞中滞留代谢及小肠外排机制的研究进展,并对如何提高乳源ACE抑制肽的口服生物利用度提出展望。
鱼类肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶研究进展
杜翠红,曹敏杰*
2013, 34(9):  336-339.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309067
摘要 ( 1135 )   HTML ( 0)   PDF (1449KB) ( 215 )  
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本文综述鱼类肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(myofibril-bound serine proteinase,MBSP)的分离纯化、酶学特性、分子生物学及基因重组表达等方面的研究进展。鱼类MBSP是一种弱碱性蛋白酶,它普遍存在于鱼类肌肉中。MBSP降解肌原纤维蛋白是造成鱼糜凝胶劣化的主要原因。同时,由于鱼类MBSP具有良好的热稳定性及对精氨酸或赖氨酸残基羧基端特异分解的底物特异性,因此,该蛋白酶有望开发成为一种新颖的工具酶应用于蛋白质质谱鉴定等研究领域。

脱酰胺改性蛋白和肽的研究进展
廖 兰1,赵谋明2,*,汪少芸1,黎清金1
2013, 34(9):  340-345.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309068
摘要 ( 1274 )   HTML ( 0)   PDF (1735KB) ( 497 )  
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自然界中大多数蛋白富含酰胺基团(天冬氨酰胺和谷氨酰胺),这些侧链酰胺基团在一定条件下易发生脱酰胺反应变成羧基、释放氨气、伸展蛋白。对于食品蛋白,脱酰胺是制备功能性蛋白的重要途径之一;对于人体蛋白或肽,脱酰胺引发蛋白和肽的反转、延展和老化。本文深入阐述现今脱酰胺改性对食物蛋白和人体蛋白(或肽)作用和反应机制的研究进展和发展趋势,以期为后续学者深入研究脱酰胺改性在食品加工和生物医学的应用提供一定的参考。

水酶法提取大豆油的研究进展
江连洲,李 杨,王 妍,王 欢
2013, 34(9):  346-350.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309069
摘要 ( 3385 )   HTML ( 0)   PDF (2130KB) ( 365 )  
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本文介绍水酶法提取大豆油的原理、基本工艺过程及特点,对该工艺的主要影响因素以及提取的大豆油品质作出重点阐述,并对该技术的应用前景进行展望。

微生物酶高效异源表达策略的最新研究进展
杨海泉,刘 龙,李江华,堵国成,陈 坚
2013, 34(9):  351-357.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309070
摘要 ( 1776 )   HTML ( 0)   PDF (1555KB) ( 202 )  
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酶是一种高专一性的生物催化剂,在化工、农业、医药、食品、纺织、饲料等领域具有广泛应用。常见的酶表达宿主包括大肠杆菌、芽孢杆菌、丝状真菌、酵母、乳酸菌等。不同类型的表达宿主具有不同的特点,如细菌宿主可用来快速地过量表达原核来源的酶,但真核来源的大分子蛋白由于翻译后修饰的原因往往不能在细菌表达系统中正确表达,仅可以在真核表达宿主中正确表达。近年来利用不同表达宿主实现工业酶的高效异源表达取得了很大进展。本文系统总结了在不同表达宿主中实现工业酶高效异源表达策略的最新研究进展,并对工业酶高效异源表达技术的发展趋势进行了展望。
功能性低聚糖合成中糖基转移酶研究进展
李 玉,路福平,王正祥
2013, 34(9):  358-363.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309071
摘要 ( 2017 )   HTML ( 0)   PDF (1553KB) ( 931 )  
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低聚异麦芽糖、低聚果糖、岩藻糖基化寡糖和唾液酸化寡糖等功能性低聚糖因具有显著促双歧杆菌增殖的作用,已被广泛应用于婴幼儿乳粉及食品中,目前合成这些功能糖的主要途径是利用微生物所产的α-葡萄糖基转移酶、果糖基转移酶、岩藻糖基转移酶或唾液酸转移酶等糖基转移酶,以葡萄糖、蔗糖或乳糖等作为底物进行合成。本文针对这几类微生物糖基转移酶的来源、性质、活性、表达和在功能性低聚糖合成中的应用以及相关研究进行简要的概括和总结,为高活力糖基转移酶的研究与开发以及改善其在功能低聚糖生产中的应用性能提供一定的参考。
胰蛋白酶抑制剂的结构与功能研究进展
王荣春1,孙建华2,何述栋1,马 莺1,*
2013, 34(9):  364-368.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309072
摘要 ( 1782 )   HTML ( 0)   PDF (1612KB) ( 1441 )  
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胰蛋白酶抑制剂属于丝氨酸蛋白酶抑制剂家族,其生理功能与防病虫害有关。近年来胰蛋白酶抑制剂因其独特的生理功能,如抗癌、抗病毒等,引起了广泛关注。本文对胰蛋白酶抑制剂的分类、典型的结构、功能及其提取和研究方法进行阐述,并对其应用潜力和存在的问题进行讨论,以期为胰蛋白酶抑制剂的进一步研究提供一定的参考。
食品蛋白质的糖基化反应:美拉德反应或转谷氨酰胺酶途径
宋春丽1,2,赵新淮2,*
2013, 34(9):  369-374.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309073
摘要 ( 3176 )   HTML ( 1)   PDF (1500KB) ( 750 )  
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糖蛋白具有独特的功能性质。本文综述食品蛋白质的2种不同糖基化反应途径:广泛采用的美拉德反应途径和最近开发的转谷氨酰胺酶催化途径,简述美拉德反应蛋白质糖基化的化学机制、产物结构与重要功能性质变化;同时,介绍转谷氨酰胺酶催化的蛋白质糖基化的优点,及其对一些蛋白质功能性质的影响和该途径未来的研发潜力。
蛋白质的消化吸收及其功能评述
庞广昌,陈庆森,胡志和,解军波
2013, 34(9):  375-391.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309074
摘要 ( 2874 )   HTML ( 0)   PDF (1719KB) ( 1043 )  
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蛋白质及其肽类食品,不仅是人体重要的营养物质,而且具有重要的健康功能。大量研究表明,单独食用蛋白质或氨基酸,尽管其氨基酸组成是均衡的,也不如食用酶解肽,这说明蛋白质经过酶解不仅可以为机体提供氨基酸营养,还可以产生多种功能肽,对机体健康发挥重要功能。但是,机体是一个自我调节、自我更新和自稳定系统,它的免疫防御系统不允许异己分子的生物大分子进入机体,特别是蛋白质或多肽,因为它们有可能是入侵者。即使少量蛋白分子可以偶尔进入体内,那主要是因为机体需要从肠道中采集样品,以便认识周围的物质世界,从而针对它们提前构成其获得性免疫防御系统。进入体内的蛋白质或多肽并不是为了让他们发挥功能,而是很快被处理和酶解,由抗原提呈细胞将其抗原决定簇提交给T细胞,由微皱褶(M)细胞负责将完整蛋白传递给B细胞作为抗原表位,激活B细胞,从而构成机体的获得性免疫的基础。本文经过对相关研究成果的综合分析认为:酶解肽主要是通过和胃肠系统中的微生物和受体相互作用发挥其生物功能。另外,和氨基酸相比,短肽,特别是二、三肽更容易被其运载体(PepT1)吸收,而且效率更高,更有利于机体中不同组织和器官的利用,从而构成氨基酸营养吸收和利用的基础,同时对机体营养和吸收控制发挥重要的调节作用。通过对蛋白质的消化和吸收及其功能的评述试图为肽类功能性食品开发提供理论依据和参考。

酶在葡萄酒生产中的应用
刘富兵,刘延琳*
2013, 34(9):  392-398.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309075
摘要 ( 2018 )   HTML ( 0)   PDF (1363KB) ( 602 )  
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酶作为高效生物催化剂广泛用于葡萄酒酿造的各个工艺环节中,包括果汁澄清、浸渍、葡萄酒过滤、尿素脱除等。酶的使用不仅增加了葡萄酒理化性质的稳定性,而且大大改善了葡萄酒的香气和色泽,提高了葡萄酒的质量。国际葡萄和葡萄酒组织(OIV)规定了在酿酒过程中可以使用以下4种不同来源的酶制剂:来自黑曲霉(Aspergillus niger)的果胶酶(pectinase);来自木霉菌(Trichoderma harzianum)的β-葡聚糖酶(β-glucanase);来自发酵乳杆菌(Laetobaeillus fermentum)的尿素酶(urease);来自鸡蛋清的溶菌酶(lysozyme)。本文简要介绍了果胶酶、葡萄糖苷酶、葡聚糖酶、溶菌酶和尿素酶等的基本特性,讨论了它们在葡萄酒生产中的运用及其对葡萄酒质量的影响。
蛋源性抗菌肽的研究进展
王俊杰1,2,赵 燕1,2,*,涂勇刚3,罗序英1,2,李建科1,2,杨有仙1,2,邓文辉1,2
2013, 34(9):  399-403.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309076
摘要 ( 1167 )   HTML ( 0)   PDF (1434KB) ( 389 )  
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抗菌肽具有分子质量小、热稳定性高、抗菌谱广等特点,已成为生物领域研究的热点之一,而富含蛋白质的禽蛋成为分离天然或制备抗菌肽的研究对象。本文综述蛋源性抗菌肽的来源、抗菌活性以及结构与活性之间的关系,提出蛋源性抗菌肽研究中存在的问题,并对蛋源性抗菌肽的研究与应用进行展望。
宏基因组技术及其在酶制剂中的应用
于 雷,于 丽,张 薇,陆丽丽
2013, 34(9):  404-407.  doi:10.7506/spkx1002-6630-201309077
摘要 ( 1140 )   HTML ( 0)   PDF (1411KB) ( 432 )  
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自然环境中有超过99%的微生物是不可培养的。使用宏基因组技术,人们首次实现了对不可培养微生物的开发,这为探索和挖掘新的酶制剂和活性小分子提供了更为有力的技术手段。本文重点介绍宏基因组技术最新的研究进展及其在新酶开发中的成功应用,以期利用宏基因组技术推进新酶开发,为其在食品工业中的应用提供有效途径。