为了明确硒在玉米蛋白中的赋存形式,采用高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS/MS),结合质谱数据库比对以及高效液相色谱-等离子体质谱法(HPLC-ICP/MS),对富硒玉米蛋白水解物中硒肽及含硒氨基酸的结构进行鉴定。结果确定了5个小肽,其氨基酸序列分别为:SeMet-MeSeCys-Glu、Met-MeSeCys-Glu、MeSeCys-Glu-Asp、Ile-MeSeCys-Glu、γ-Glu-MeSeCys;确定了4种含硒氨基酸,分别为硒代蛋氨酸(SeMet)、硒代乙硫氨酸(SeEt)、L-硒-甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)、硒代胱氨酸(SeCys2)。借助于标样对含硒氨基酸和二肽进行定量,5个硒肽均含MeSeCys,其中只有一个肽段含SeCys2;但在含硒氨基酸中则是以SeMet含量最高为(586.3±49.5)ng/g,最低的是SeCys2为(102.6±9.0)ng/g。
以大豆分离蛋白为对象,研究添加天然抗氧化剂(β-胡萝卜素和生育酚)对其在贮藏12周前后的羰基、巯基含量以及溶解性、乳化性、凝胶性的影响。结果表明:贮藏12周后,对照大豆分离蛋白羰基含量大大升高,巯基含量下降,溶解度、乳化特性都显著降低,但凝胶强度却升高。添加β-胡萝卜素显著抑制了大豆分离蛋白在贮藏12周后的羰基含量的增加(P<0.05);同时β-胡萝卜素和生育酚的添加都能够有效抑制总巯基的降低(P<0.05)。在功能性方面,添加β-胡萝卜素以及生育酚一定程度能够抑制大豆分离蛋白溶解性和乳化性在贮藏后的下降;两种抗氧化剂都部分抑制了贮藏后大豆分离蛋白凝胶强度的提高。
目的:对采用碱处理-胃酶水解方法分离的蓝鲨软骨Ⅱ型胶原蛋白的物理化学特性进行研究。方法:蓝鲨软骨经冷冻干燥粉碎,顺次用碱处理、胃蛋白酶限制性水解、盐析和透析获得Ⅱ型胶原蛋白。采用SDS-PAGE、氨基酸成分分析、紫外光谱扫描和差示扫描量热法对提取的Ⅱ型胶原蛋白进行鉴定。结果:蓝鲨Ⅱ型胶原蛋白由分子质量为130kD的α1链构成,甘氨酸是蓝鲨Ⅱ型胶原蛋白含量最高的氨基酸为356‰,富含丙氨酸、脯氨酸和羟脯氨酸,且肽链氨基酸残基具有Gly-X-Y的构成特点,蓝鲨Ⅱ型胶原蛋白在226nm波长处有紫外吸收峰,变性温度为41℃。结论:采用碱处理-限制性酶水解分离得到蓝鲨Ⅱ型胶原蛋白,具有Ⅱ型胶原蛋白的典型特征。
目的:探讨不同加热方法(微波、高压、热空气流、水蒸气)下牛肉酶解蛋白与葡萄糖之间的反应活性。方法:以精制新鲜牛肉为基料,采用分子质量分布分析法和感官品评分析法。结果:在不同加热方法处理中,牛肉酶解蛋白类物质活性发生变化的方式不同,主要是降解作用、分解作用和聚合作用,而Maillard反应作用方式不太显著,体现牛肉风味物质分布于1000~4999D区间,主要集中于3000~4999D之间,结论:在3000~4999D这个区间的牛肉风味物质烤香不明显,主要体现良好的牛肉本味和浓厚的口感。
以雅安藏茶为材料,用体积分数70%乙醇溶液提取后经系统萃取分离得到7种雅安藏茶级分,并测定各个级分的主要成分及对α-淀粉酶活性的影响,筛选其活性成分。结果表明:雅安藏茶抑制α-淀粉酶的活性成分是儿茶素、茶褐素和咖啡碱,以对α-淀粉酶活性的最大抑制率为标准,各个活性成分抑制能力依次为儿茶素>茶褐素>咖啡碱。
磁性纳米粒子快速分离纯化牦牛血液中超氧化物歧化酶(SOD),并建立吸附动力学模型,研究结合液(磷酸盐缓冲溶液)和解离液(醋酸钠缓冲溶液) pH值、NaCl浓度和吸附时间对SOD比活力和回收率的影响,以此确定最佳分离纯化条件。结果表明:随着结合液pH值增大,SOD比活力先升高后急剧降低,SOD回收率一直呈增大趋势,最佳pH值为7.5;随着结合液NaCl浓度增加,SOD比活力和回收率先升高,后降低,最佳NaCl浓度为0.5mol/L;随着解析液pH值增大,SOD比活力逐渐升高,而SOD回收率呈减小降趋势,最佳pH值为5.0;磁性纳米粒子对SOD最佳吸附时间为2h;随初始酶粗品浓度的增加,磁性纳米粒子对SOD吸附作用拟合Langmuir吸附模型,且获得的SOD比活力始终维持在较高水平(3000~3250U/mg),说明磁性纳米粒子对SOD分离效果良好。
通过测定蛋白质含量为7.8%的高浓度复原牛乳在发酵过程中酸度、活菌数和氨基酸态氮的变化,研究新型高浓度发酵乳基料的发酵特性。在高浓度复原乳基料发酵的基础上,添加复合酶酶解与干酪乳杆菌发酵同步进行,获得一种酸度和氨基酸态氮含量更高的高浓度发酵乳基料。复合酶的添加对高浓度发酵乳基料的滴定酸度和氨基酸态氮含量具有很大影响。结果表明:干酪乳杆菌发酵高浓度复原牛乳72h后,滴定酸度为268.5 °T,氨基酸态氮含量为0.117g/100g。发酵与酶解同步72h后,滴定酸度为414.4°T,氨基酸态氮含量为0.132g/100g。复合酶添加量越高,滴定酸度和氨基酸态氮含量越高,但复合酶添加量对高浓度发酵乳基料的pH值和活菌数变化无影响。
运用圆二色光谱(CD)和荧光光谱法(FS),探讨茶叶儿茶素(EGCG)对胰脂肪酶(PPL)二级和三级结构的变化规律;同时,以橄榄油为底物,研究反应时间和EGCG浓度对胰脂肪酶活性的影响。结果表明:EGCG对PPL的抑制作用1h后达到最大值,抑制率为30%。EGCG低浓度(≤1mmol/L)时,EGCG对PPL的抑制率随EGCG浓度升高而增大,当EGCG超过此浓度时,抑制率随EGCG浓度的升高基本保持不变。Lineweaver-Burk作图可知,EGCG对PPL的抑制类型为非竞争性抑制作用。CD和FS分析表明,EGCG对PPL二级和三级结构均有一定的影响,PPL二级结构的变化与EGCG浓度呈正相关,而三级结构的变化与EGCG浓度没有显著的相关性。FS图谱还表明,EGCG对PPL色氨酸存在荧光淬灭现象,且静态淬灭和动态淬灭同时存在。
采用交联酶聚集体技术制备了海藻糖合酶交联酶聚集体(CLEAs),研究了不同沉淀剂、酶与交联剂比例、交联强度及硼氢化钠还原处理对海藻糖合酶CLEAs活性的影响及其结构特征与反应性能。结果表明:采用10mg/mL的酶浓度以30%的PEG为沉淀剂,以终浓度0.5%的戊二醛室温交联2h,再以硼氢化钠还原处理后,制备得到的海藻糖合酶CLEAs最适催化温度为70℃,比游离酶提高20℃,最适pH为7.0,与游离酶相比,CLEAs的温度及pH稳定性均得到提高,对Zn2+、Cu2+、Fe2+、Al3+金属离子的抗性明显增强。微观形貌分析表明单个海藻糖合酶CLEA粒径在0.2-0.5μm,众多CLEA以“脚手架”结构形成大小不一的集簇。
金属蛋白酶S2P同源蛋白在行光合作用的蓝藻中广泛存在。S2P蛋白酶通过在膜切割转录调控因子(anti-σ因子),释放σ因子来参与胁迫响应是跨膜信号转导的保守机制。集胞藻PCC6803中S2P蛋白酶参与胁迫响应的跨膜信号转导,但其作用机理及底物均未明确。经过深入考察分析,实验锁定了4对σ因子和anti-σ因子的组合:SigEChlH(Slr1055)、SigI(Sll0687)-Sll0688、SigG(Slr1545)-Slr1546及SigH(Slr0856)-Sll0857。以pET-30b(+)为载体,通过重组表达纯化,成功获得一系列S2P假定底物的重组蛋白:全长anti-σ因子及截去羧基端部分序列的截短片段,包括Slr1055、Slr1055△(1~232)、Sll0688、Sll0688△(1~152)、Slr1546、Slr1546△(1~174)、Sll0857、Sll0857△(1~101)和大肠杆菌的S2P底物RseA(1~148)。为下一步在体外重构S2P蛋白酶与底物的酶切体系、阐释蓝藻体内S2P介导的级联信号转导机制奠定了基础。
为实现硫酸软骨素酶AC(chondroitinase AC,ChonAC)在大肠杆菌中高效表达,通过PCR方法从肝素黄杆菌(Pedobacter heparinus)中扩增得到ChonAC基因cslA,采用融合蛋白技术构建麦芽糖结合蛋白(maltose-bindingprotein,MBP)与ChonAC的融合表达载体(MBP-ChonAC),并在低温(15℃)条件下实现MBP-ChonAC的可溶活性表达,通过MBPTrap HP可实现一步纯化,使纯度可达95%以上,酶比活力可达94.1IU/mg融合蛋白(即相当于143.8IU/mgChonAC蛋白当量)。对MBP-ChonAC的酶学研究发现,其最佳催化pH值为7.5~8.0,最佳Ca2+浓度为20mmol/L,最适NaCl浓度为50mmol/L,最佳作用温度为20~35℃。MBP-ChonAC具有较好的热稳定性,在30℃时其半衰期可达8.3h。同时对其以硫酸软骨素A为底物的动力学常数测定发现,MBP-ChonAC相比ChonAC其Km稍有增大而催化常数kcat稍有降低,但是差别不大,表明MBP的融合没有对ChonAC的催化能力造成影响。通过宿主优化、诱导浓度优化及培养基优化进一步提高了MBP-ChonAC的表达量,其摇瓶培养酶活力就可达10800.5IU/L。
用碱性蛋白酶水解食源性明胶以制备抗冻多肽,通过控制酶解条件获得具有抗冻活性的明胶多肽酶解液,并对其进行色谱分离、质谱鉴定及氨基酸全序列测定。结果表明:当酶与底物比1:15、酶解时间30min、酶解温度45℃时,所获得的明胶多肽酶解液的抗冻活性最高;酶解制备的明胶多肽液经过冷-热循环(cold-heat-stage)后抑制冰晶生长和抗冻活性表现出特定的规律,说明酶解条件的控制优化是实现明胶多肽液抗冻活性的关键。通过Sephadex G-50、SP Sephadex C-25、C18-RPLC色谱分离和MALDI-TOF质谱鉴定,确定分子质量为2107D的特异性多肽表现出显著的抗冻活性。通过Edman降解法测得其氨基酸全序列为GERGFPGERGSPGAQGLQGPR。
以重组表达铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa 41磷脂酶C的大肠杆菌BL21 (DE3)/pET28a-plcH为考察菌株,从TB培养基出发,在优化缓冲液、碳源种类和质量浓度的基础上,比较异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)、乳糖诱导重组酶表达的效果,并考察甘氨酸对重组酶发酵的影响;最后,在7L发酵罐规模对上述优化工艺进行放大验证。结果表明:重组大肠杆菌最适培养基组成为:蛋白胨12g/L、酵母膏24g/L、甘油5g/L,0.25mol/L Tris-HCl(pH7.2~7.4)缓冲液配制;在此培养基中添加卡那霉素(Kana)的质量浓度至0.15mg/mL,37℃、200r/min培养6h后,添加乳糖至终质量浓度为5g/L,在25℃、150r/min诱导培养20 h,重组磷脂酶C活力可达到(1422.42±37.17)U/mL;7L发酵罐实验中,总酶活力达到(11583.35±70.21)U/mL,比摇瓶条件下提高了7倍左右,其中胞内酶活力最高为(10957.97±58.03)U/mL,胞外酶活力最高为(645.27±13.87)U/mL。
通过醋酸纤维素-聚丙烯复合膜对转谷氨酰胺酶进行固定,以酶活力为指标,进行单因素试验,考察酶液质量浓度、吸附时间、戊二醛添加量、戊二醛交联时间对转谷氨酰胺酶活力的影响,确定最佳固定化条件为:酶液质量浓度15mg/mL、吸附时间3h、戊二醛添加量0.3g/100mL、戊二醛交联时间4h。在最佳固定化条件下固定的酶活力可达16.1U/g膜。对固定化酶和游离酶的酶学性质进行比较,得出游离酶最适温度为35~40℃,而固定化酶膜最适温度为45~50℃;游离酶最适pH值为6~7,固定化酶膜最适pH值为5~6,固定化酶比游离酶向酸性偏移。
目的:探讨重组毕赤酵母葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)的分离纯化过程及其性质。方法:摇瓶发酵得到的粗酶液经Q-Sepharose Fast Flow层析纯化,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)确定其分子质量,用紫外和荧光分光光度计研究其光谱特征。结果:获得GOD的纯品,酶的纯化倍数为1.35倍,酶活回收率为92.7%,天然分子质量为150kD,亚基分子质量为75kD;酶活力在pH5.0~8.0和55℃以下稳定,最适pH值为6.0,最适温度为40℃;以葡萄糖为底物的酶学动力学常数Km值为21.06mmol/L;Hg2+、Ag+、Cu2+、Fe2+对其有强烈的抑制作用;该酶在275nm波长处有最大紫外光吸收,在344nm波长处有最大荧光吸收峰;液体状态下该酶在4℃条件下放置6个月活性没有损失,常温下可保存3~5d。结论:重组毕赤酵母葡萄糖氧化酶纯化成本低,收率高,有利于大规模纯化,得到的纯品稳定性好,具有较高的利用价值。
采用壳聚糖絮凝和戊二醛交联的方法,对表达生产Thermobifida fusca葡萄糖异构酶(GIase)的重组大肠杆菌细胞进行固定化工艺研究,以期获得高性能和低成本的固定化产酶细胞方法。考察影响细胞絮凝和交联的各种因素,并对固定化酶制剂的理化性质、动力学常数进行测定。结果表明:最佳的固定化条件为在高密度发酵液中添加0.6%硅藻土和5mmol/L Mg2+,经60℃热处理30min后,在壳聚糖终质量分数0.1‰、pH5.5、充分搅拌条件下絮凝,酶活回收率达98%;絮凝产物在戊二醛体积分数0.25%、pH6.5、轻微搅拌条件下交联3h,以未交联的样品作参照(100%),交联样品的酶活保留率达80%。相对于游离GIase,此条件下制备的固定化GIase的最适温度仍为80℃、最适pH值从10降低至9;在工业生产应用条件下,固定化GIase的初始酶活力达到356U/g,半衰期为61d,能够满足高果糖浆工业的生产要求。
在碱性蛋白酶Alcalase与N120P蛋白酶复合酶解花生分离蛋白制备花生短肽的基础上,采用凝胶过滤色谱与制备型反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离纯化得到27个组分,从中筛选出ACE抑制活性最高的组分P8,其在0.010mg/mL质量浓度条件下ACE抑制率达85.77%,IC50值为0.0052mg/mL(6.42μmol/L)。采用基质辅助激光解吸附电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-TOF MS)对P8的氨基酸序列进行分析,得出P8的相对分子质量为808.80,氨基酸序列为Lys-Leu-Tyr-Met-Arg-Pro(KLYMRP)。通过固相合成的方法合成短肽KLYMRP,并证实其具有显著的ACE抑制活性,ACE抑制IC50值为0.0038mg/mL(4.69μmol/L)。构效关系分析结果表明:短肽Lys-Leu-Tyr-Met-Arg-Pro的C末端为Pro,N末端为碱性氨基酸Lys,且肽的疏水性很强,有利于与ACE活性部位的结合;短肽KLYMRP与ACE活性位点的残基形成5个氢键,一个Pi-Cation相互作用,并与锌离子形成配位键,这些作用力共同稳定了短肽-ACE复合物的构象,从而有利于ACE抑制活性的发挥。
通过响应面方法优化固体发酵培养基,以提高黑曲霉ZJUQH产α-半乳糖苷酶的能力。在前期研究的基础上,通过部分因子试验对蛋白胨、Na2HPO4·12H2O、料液比和接种量进行系统考察,筛选出两个影响较显著的因素料液比和蛋白胨添加量,然后通过中心组合试验进一步优化,建立以α-半乳糖苷酶酶活力为响应值的二次回归方程模型,获得了最优的固体发酵培养基组成:蛋白胨0.6g、Na2HPO4·12H2O 0.08g、料液比1:2.44(m/V)接种量1.5mL/5g。在该优化的培养条件下,固态发酵6d产α-半乳糖苷酶的酶活达到(77.21±2.01)U/g , 比优化前(蛋白胨0.4g、Na2HPO4·12H2O 0.08g、料液比1:3、接种量1.5mL/5g)培养得到的酶活力最高值(49.05±2.11)U/g提高57.41%。
以黑曲霉H1-9b(Aspergillus niger H1-9b)作为葡萄糖氧化酶生产菌株,通过单因素和正交试验设计,优化提高酶活力的发酵条件。结果表明:最佳反应条件为:接种量200μL孢子悬液、装液量80mL、初始pH5.3、转速200r/min、表面活性剂吐温-80添加量3%。在此条件下,葡萄糖氧化酶活力提高到68.96U/mL,为不添加吐温-80发酵产酶量28.60U/mL的2.4倍。
用PCR方法以Ⅵ型胶原蛋白基因组DNA为模板,获得Ⅵ型胶原蛋白α2链基因,并将该基因插入到表达载体pPIC9K,对重组质粒pPIC9K-COL6A2所含的目的片段进行双向测序。将测序正确的重组质粒用限制性内切酶SalⅠ线性化,经电击转化到毕赤酵母GS115感受态细胞中。通过MM/MD法进行甲醇利用表型的筛选,PCR鉴定目的基因的整合及G418梯度筛选高拷贝转化菌。在酵母α-Factor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下,目的蛋白分泌表达到胞外。1%甲醇诱导72h的发酵液,经SDS-PAGE电泳鉴定该重组蛋白分子质量约为32kD。
以NaIO4活化的右旋糖苷为修饰剂,研究修饰反应条件对生姜蛋白酶化学修饰效果的影响与修饰前后酶学性质及构型构象的变化。结果表明:较佳修饰条件为温度42℃、pH 6.0、酶与活化右旋糖苷质量比1:22、修饰时间3h。与修饰前天然生姜蛋白酶相比,修饰酶的相对酶活力提高了2.0倍,酶蛋白氨基修饰率为57.8%。以酪蛋白为底物时,修饰酶的最适温度、最适pH值和酶反应动力学参数Km值较天然生姜蛋白酶均有所降低,热稳定性明显增强;修饰酶的紫外光谱吸收峰向长波长方向偏移,构型构象发生了变化。
为获得高抗氧化活性的带鱼蛋白酶解物,以带鱼为原料,以DPPH自由基清除率为主要指标,水解度为辅助指标,采用4种蛋白酶酶解带鱼,筛选出最佳用酶,并运用响应面分析方法优化带鱼蛋白酶解条件;分析酶解物的还原力和对·OH的清除能力,并测定分子质量,分析氨基酸组成。结果表明:碱性蛋白酶(Alcalase)为带鱼蛋白酶解的最适用酶,酶解物清除DPPH自由基的最优条件为:温度48℃、酶解时间3.80h、固液比1:3、加酶量1.65%,在此条件下,DPPH自由基清除率达到60.13%;酶解物有较好的还原力,对·OH有很好的清除作用;其分子质量为1311D;酶解物含亮氨酸等具有清除自由基作用较好的氨基酸,其含量占总氨基酸含量的35.10%;构成肽的氨基酸含量占总氨基酸含量的89.8%,低分子肽为带鱼蛋白酶解物的主要成分。
以氧自由基清除能力(ORAC)为评价指标,在单酶与多酶组合水解工艺制备黑豆肽比较实验的基础上,采用超滤与大孔树脂吸附、乙醇分级洗脱分离纯化抗氧化黑豆肽;通过氨基酸组成测定,分析抗氧化活性与多肽氨基酸侧链基团性质的关联性。结果表明:采用Alcalase、Flavourzyme和Neutrase组合水解,相对分子质量<3000的超滤组分具有较强的抗氧化活性;DA201-C树脂对抗氧化肽的分离效果优于其他3种实验树脂,体积分数为75%乙醇洗脱组分的平均疏水性值和碱性氨基酸含量较高,具有相对最强的ORAC值;以Trolox当量与谷胱甘肽(GSH)当量测定的ORAC值呈极显著的正相关关系(P<0.01)。
目的:建立一种测定壳聚糖酶活力的新方法——3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙盐酸盐水合物(MBTH)法。方法:以动力学法通过测定水解过程中壳聚糖释放还原端基的速率来计算酶活力,并以测定纤维素酶中壳聚糖酶的微量活力为例,对测定过程中的几个关键参数进行讨论。结果:在37℃、pH6.0酶解条件下,底物壳聚糖溶液的测定质量终浓度需达到2mg/mL以上;酶解反应时间控制在60min内为宜,可以用终点法定量测得壳聚糖酶活力。结论:通过比较MBTH法、DNS法和铁氰化钾法发现MBTH法更准确、更灵敏、检测范围宽、操作简便。其检测限为13mU/mL,而铁氰化钾法是该法的1.6倍,DNS法是该法的116倍。应用本法所测其酶解壳聚糖的Km值为0.12mg/mL,而用DNS法则较难准确测得。
目的:通过比较肾脏组织中血管紧张素转化酶Ⅰ(angiotensin converting enzyme Ⅰ,ACE)-血管紧张素Ⅱ(ang iotensin Ⅱ,AngⅡ)-血管紧张素Ⅱ受体1亚型(Ang Ⅱ type 1 receptor,AT1)/血管紧张素转化酶2(angiotensinconverting enzymeⅡ,ACE2) -血管紧张素1-7(angiotensin 1-7,Ang 1-7)-Mas及肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensinsystem,RAS)相关调节因子在肾损伤过程中的表达差异,探讨ACE2在糖尿病大鼠肾脏损伤发生发展中的作用及可能的分子机制。方法:研究选用STZ腹腔注射致大鼠糖尿病,分别于15d(对照1组和模型1组)和30d(对照2组和模型2组)断头处死,取肾脏组织。PCR检测肾脏组织中ACE、AT1、ACE2和Mas mRNA的表达水平;放免法测定肾脏局部组织中肾素活性和Ang I、AngⅡ含量。结果显示:与对照组相比,模型1组大鼠肾脏组织中ACE2 和其Mas受体mRNA表达升高,ACE mRNA表达无显著差异,AT1 mRNA表达下降,ACE/ACE2 mRNA比值下降;模型2组大鼠肾脏组织中ACE2 mRNA表达低于对照2组,Mas受体mRNA表达无显著变化,ACE mRNA的表达高于对照2组,AT1受体有同样升高趋势,ACE/ACE2 mRNA表达比值较对照2组升高,有显著性差异。放射免疫分析结果显示:模型1组肾脏局部组织中肾素活性和Ang I含量低于对照1组,有显著性差异(P<0.05),而AngⅡ含量高于对照1组,无显著性差异(P>0.05);模型2组肾素活性和Ang I极显著高于对照2组(P<0.01),同时AngⅡ也显著高于对照2组(P<0.05)。结论:ACE与ACE2表达失调是糖尿病大鼠肾损伤发生发展的原因之一。损伤初期以ACE2-Ang(1-7)-Mas轴的激活占优势;严重损伤时,ACE-Ang Ⅱ-AT1轴的激活占优势。ACE2在早期肾脏病变的发病中通过降解AngⅡ发挥积极的保护作用。
目的:研究1,3-二氯-2-丙醇(1,3-DCP)对体外睾丸间质细胞活性及孕酮合成的影响。方法:分别用0.5、1、2、4、6mmol/L浓度的1,3-DCP作用R2C细胞48h,利用MTT法获得1,3-DCP对R2C细胞的IC25、IC50以及IC75。选取以上3种不同浓度的1,3-DCP作用细胞4h或24h,通过单细胞电泳法(SCGE)检测其作用4h时对DNA损伤的程度;通过放射免疫法(RIA)检测4h或24h处理时对孕酮合成的影响。结果:与对照组相比,1,3-DCP能抑制R2C细胞的增殖,其IC25、IC50、IC75分别为(1.161±0.046)、(1.897±0.018)、(3.100±0.040)mmol/L;作用4h对R2C细胞DNA有损伤作用;各浓度组作用4h或24h后与对照组相比均能降低孕酮的合成。结论:1,3-DCP能抑制R2C的活性,影响细胞孕酮的合成。
采用丙酮沉淀、硫酸铵沉淀、Q阴离子交换柱、SP阳离子交换柱、蛋白热变性法对小米米糠蛋白进行逐步分离纯化,并结合细胞增殖抑制实验(MTT法),筛选纯化出小米米糠中抗肿瘤活性蛋白(FMB)。体外抗肿瘤活性实验表明:不同质量浓度(0.025、0.05、0.075、0.1μg/μL)的FMB均可抑制人结肠癌细胞株DLD1和人宫颈癌细胞株HeLa的增殖,并且具有明显的剂量依赖性;而对正常人肝细胞HL-7702无明显抑制作用。倒置显微镜下观察细胞形态特征发现:经FMB处理48h后,DLD1和HeLa细胞出现细胞核明显皱缩、部分细胞漂浮死亡等凋亡特征;而对正常肝细胞株HL-7702无明显影响。
从新生 SD大鼠乳鼠中提取成骨细胞后,采用 MTT 法进行细胞增殖实验,比较不同加热处理条件对乳铁蛋白(Lf)促成骨细胞增殖活性的影响。结果表明:未加热乳铁蛋白能显著促进成骨细胞增殖,且在50~500μg/mL范围内呈剂量依赖关系;在24、48、72h不同时间节点上LF对成骨细胞的作用有所差异。与未加热乳铁蛋白相比,65℃/30min和72℃/10s加热处理对乳铁蛋白的活性影响较小;85℃/10min和95℃/10min处理后乳铁蛋白的促成骨活性下降,而且与低质量浓度的实验组相比,热处理对高质量浓度的乳铁蛋白实验组影响较大。
本文综述鱼类肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(myofibril-bound serine proteinase,MBSP)的分离纯化、酶学特性、分子生物学及基因重组表达等方面的研究进展。鱼类MBSP是一种弱碱性蛋白酶,它普遍存在于鱼类肌肉中。MBSP降解肌原纤维蛋白是造成鱼糜凝胶劣化的主要原因。同时,由于鱼类MBSP具有良好的热稳定性及对精氨酸或赖氨酸残基羧基端特异分解的底物特异性,因此,该蛋白酶有望开发成为一种新颖的工具酶应用于蛋白质质谱鉴定等研究领域。
自然界中大多数蛋白富含酰胺基团(天冬氨酰胺和谷氨酰胺),这些侧链酰胺基团在一定条件下易发生脱酰胺反应变成羧基、释放氨气、伸展蛋白。对于食品蛋白,脱酰胺是制备功能性蛋白的重要途径之一;对于人体蛋白或肽,脱酰胺引发蛋白和肽的反转、延展和老化。本文深入阐述现今脱酰胺改性对食物蛋白和人体蛋白(或肽)作用和反应机制的研究进展和发展趋势,以期为后续学者深入研究脱酰胺改性在食品加工和生物医学的应用提供一定的参考。
本文介绍水酶法提取大豆油的原理、基本工艺过程及特点,对该工艺的主要影响因素以及提取的大豆油品质作出重点阐述,并对该技术的应用前景进行展望。
蛋白质及其肽类食品,不仅是人体重要的营养物质,而且具有重要的健康功能。大量研究表明,单独食用蛋白质或氨基酸,尽管其氨基酸组成是均衡的,也不如食用酶解肽,这说明蛋白质经过酶解不仅可以为机体提供氨基酸营养,还可以产生多种功能肽,对机体健康发挥重要功能。但是,机体是一个自我调节、自我更新和自稳定系统,它的免疫防御系统不允许异己分子的生物大分子进入机体,特别是蛋白质或多肽,因为它们有可能是入侵者。即使少量蛋白分子可以偶尔进入体内,那主要是因为机体需要从肠道中采集样品,以便认识周围的物质世界,从而针对它们提前构成其获得性免疫防御系统。进入体内的蛋白质或多肽并不是为了让他们发挥功能,而是很快被处理和酶解,由抗原提呈细胞将其抗原决定簇提交给T细胞,由微皱褶(M)细胞负责将完整蛋白传递给B细胞作为抗原表位,激活B细胞,从而构成机体的获得性免疫的基础。本文经过对相关研究成果的综合分析认为:酶解肽主要是通过和胃肠系统中的微生物和受体相互作用发挥其生物功能。另外,和氨基酸相比,短肽,特别是二、三肽更容易被其运载体(PepT1)吸收,而且效率更高,更有利于机体中不同组织和器官的利用,从而构成氨基酸营养吸收和利用的基础,同时对机体营养和吸收控制发挥重要的调节作用。通过对蛋白质的消化和吸收及其功能的评述试图为肽类功能性食品开发提供理论依据和参考。